【原理概述】

本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴(kuò)增技術(shù)：在常溫恒溫下，特殊修飾的反轉(zhuǎn)錄酶利用特異性引物和模板RNA合成cDNA鏈，反應(yīng)體系中的重組酶、單鏈 DNA 結(jié)合蛋白和 DNA 聚合酶以新合成的 cDNA 鏈為模板進(jìn)行快速核酸擴(kuò)增反應(yīng)。依賴nfo 酶的作用，加入根據(jù)模板設(shè)計(jì)的特異的分子探針，使用膠體金技術(shù)（三明治夾心法）可以對(duì)最終結(jié)果進(jìn)行檢測(cè)。

【產(chǎn)品特點(diǎn)】

本試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、反應(yīng)時(shí)間短（僅需 12 min）等優(yōu)點(diǎn)，反應(yīng)組分為干粉狀態(tài)，操作簡(jiǎn)便，易于保存。本試劑對(duì)設(shè)備要求低，金屬浴、水浴鍋等即可進(jìn)行反應(yīng)操作，無需購(gòu)買 PCR 擴(kuò)增儀等價(jià)格高昂的專屬設(shè)備。

【引物設(shè)計(jì)】

建議使用長(zhǎng)度在 30-35 bp 的引物，引物過短會(huì)影響擴(kuò)增速度和檢測(cè)靈敏度；下游引物的 5’端標(biāo)記一個(gè)修飾基團(tuán)（常用生物素）。引物設(shè)計(jì)避免形成二級(jí)結(jié)構(gòu)而影響擴(kuò)增；擴(kuò)增

子長(zhǎng)度建議在 150-500 bp。

【熒光探針設(shè)計(jì)】

在上下游引物中間，設(shè)計(jì)一段長(zhǎng)度為46-52nt與目的片段互補(bǔ)的序列；5’端修飾一個(gè)抗原標(biāo)記（典型 FAM）;在 5’端和 3’末端的中部位置標(biāo)記一個(gè) dSpacer（四氫呋喃，THF），作為 nfo 的識(shí)別位點(diǎn)；3’末端標(biāo)記一個(gè)修飾基團(tuán)，例如胺基、磷酸基團(tuán)或 C3-Spacer 等。

【試劑盒組成】

注：考慮到核酸降解問題，RNA 系列產(chǎn)品不提供正對(duì)照模板和引物探針。

【試劑盒儲(chǔ)存】

1．運(yùn)輸溫度：≤ 20 ºC的恒溫環(huán)境；

2．儲(chǔ)存條件：儲(chǔ)存溫度 ≤ -20 °C（± 5 °C）恒溫環(huán)境，避光保存，避免重壓、反復(fù)凍融；

3．產(chǎn)品有效期：14個(gè)月；

4．生產(chǎn)日期見外包裝。

【注意事項(xiàng)】

1. 由于試劑盒靈敏度非常高，在進(jìn)行反應(yīng)時(shí)請(qǐng)注意避免核酸污染，并設(shè)置空白對(duì)照；

2. 使用時(shí)請(qǐng)取出實(shí)驗(yàn)所需的 MIRA 反應(yīng)單元的數(shù)量，剩余部分請(qǐng)置于存儲(chǔ)條件下。