NK細胞（自然殺傷細胞）是一類重要的免疫細胞，能夠識別和殺傷病變細胞，發揮抗腫瘤和抗病毒的作用。為了進一步研究和應用NK細胞，需要從復雜的混合細胞懸液中分離高純度的 NK 細胞。本文將介紹一種分選試劑盒的使用方法，該試劑盒利用生物素化的抗體和識別生物素的磁珠，通過去除非NK細胞，進行高純度NK 細胞的分離。

材料和試劑：
1. 小鼠脾臟
2. 細胞培養基（如DMEM、RPMI 1640等）
3. FBS（胎牛血清）
4. NK細胞分選試劑盒（包括生物素化的抗體和識別生物素的磁珠）


實驗步驟：
1. 預處理脾臟：
   a. 將小鼠處死，并清洗脾臟表面的血液。
   b. 將脾臟轉移到含有細胞培養基的離心管中，并用細胞培養基沖洗脾臟，去除掉表面的細胞。
 
2. 制備單細胞懸液：
   a. 使用組織絞碎器或剪刀將脾臟切碎成小塊。
   b. 將脾臟碎片轉移到含有適量細胞培養基的離心管中，并用玻璃細胞棒或注射器的活塞均勻壓碎脾臟碎片。
   c. 將懸液過篩，去除大塊殘渣，獲得單細胞懸液。
3. 分選NK細胞：
   a. 取出分選試劑盒中的生物素化抗體和識別生物素的磁珠，并按照說明書中的建議稀釋至合適濃度的工作液。
   b. 加入足夠的抗體至細胞懸液中，并在室溫下進行孵育，使抗體與非NK細胞特異結合。
   c. 加入經過磁珠標記的抗體，將混合樣品與磁珠充分混合。
   d. 使用磁珠分離支架，將混合樣品貼附在支架上，讓磁珠與磁架結合。
   e. 將磁架放置在磁場中，使磁珠沉降至管底，并去除上清液。此時，非NK 細胞已被去除，剩余的NK細胞為高純度。
 
4. 洗滌和收集NK細胞：
   a. 用預先溫和的細胞培養基對管中的磁珠進行洗滌，去除雜質。
   b. 將洗脫液轉移到含有細胞培養基的離心管中，并對NK細胞進行洗滌。
   c. 通過使用細胞計數板或流式細胞儀，計數并評估分離得到的NK 細胞的存活率和純度。
   d. 根據實驗需求，可以進行后續的細胞培養、檢測和功能實驗。
實驗結果與討論：
   通過使用NK細胞分選試劑盒，可以從小鼠脾臟單細胞懸液中分離未經標記的NK細胞，并去除其他類型的細胞，獲得高純度的NK細胞。該方法對于研究和應用NK細胞具有重要意義。在分選過程中，生物素化抗體特異結合非NK 細胞，而NK細胞保持不結合。通過磁珠分離技術，可以去除非NK細胞，從而獲得高純度的NK 細胞。
該實驗通過使用分選試劑盒從小鼠脾臟單細胞懸液中分離未經標記的NK 細胞，并去除其他類型的細胞，得到高純度的NK細胞。這一實驗方法為NK細胞的進一步的研究和應用提供了重要可靠的工具，促進了對NK 細胞活性的深入研究。