逆轉錄酶與Taq DNA聚合酶的特點及應用介紹
酶是一類極為重要的生物催化劑，具有催化高效性和反應特異性。絕大多數生化反應均需要酶的參與，核酸檢測也不例外。不同類型的分子酶在核酸檢測的不同實驗階段發揮了重要的作用。
一、逆轉錄酶，分享該酶的特點和應用
逆轉錄（reverse transcription）是以RNA為模板合成DNA的過程，即RNA指導下的DNA合成。此過程中，核酸合成與轉錄（DNA到RNA）過程與遺傳信息的流動方向（RNA到DNA）相反，故稱為逆轉錄。逆轉錄過程由逆轉錄酶催化。
大多數逆轉錄酶都具有以下幾種活性。
①DNA聚合酶活性；
以RNA為模板，催化dNTP聚合成DNA的過程。逆轉錄酶的合成能力決定了產生的cDNA鏈的長短，一些基因工程改造的MMLV逆轉錄酶在單個結合位點中可以結合多達1,500個核苷酸，結合能力大概是野生型MMLV逆轉錄酶的65倍。
逆轉錄酶中不具有3'→5'外切酶活性，因此沒有校正功能，所以由逆轉錄酶催化合成的DNA出錯率比較高，基于MMLV的逆轉錄酶錯誤率在合成15,000到27,000個核苷酸中有一個錯誤核苷酸。
②RNase H活性；
由逆轉錄酶催化合成的cDNA與模板RNA形成的雜交分子，將由RNase H從RNA 5'端水解掉RNA分子。但是RNase H活性的存在可能降低逆轉錄效率，所以工程化的逆轉錄酶，通常會降低甚至消除RNase H活性，以提高cDNA合成效率。
③DNA指導的DNA聚合酶活性；
以逆轉錄合成的第一條DNA單鏈為模板，以dNTP為底物，再合成第二條DNA分子。
除此之外，工程化的逆轉錄酶都具備一定的溫度耐受性，有助于使具有堅固二級結構和/或高GC含量的RNA變性，使得逆轉錄酶能夠讀取序列，增加cDNA合成長度，提高合成效率。
GenFQ III Reverse Transcriptase是經過基因工程改造的新一代逆轉錄酶，大幅提高了熱穩定性，無RNase H活性。可以在42-55℃(高溫有利于打開RNA二級結構)條件下合成第一鏈cDNA，最佳反應溫度為50℃。具有靈敏度高、特異性高、聚合能力強、 熱穩定性強和半衰期長特點。該酶增強了與模板的親和力，適合少量模板以及低拷貝基因的逆轉錄。
合成效率為95.1%，證明cDNA的合成效率較高，而且RNA梯度稀釋線性關系良好。
二、Taq DNA聚合酶
PCR技術改變了現代分子生物學，而Taq DNA聚合酶改變了PCR。Taq DNA聚合酶是一種從Thermus aquaticm分離出的耐熱型DNA 聚合酶，主要應用在直接PCR、等位基因檢測、Sanger測序、TA克隆等領域。
Taq DNA聚合酶改具有良好的耐熱型，最適催化溫度在75-80℃，95℃半小時后仍保留50%以上的活性。Taq DNA聚合酶是少數具有5'-3'外切核酸酶活性的DNA聚合酶之一。能夠切除5’端放射性標記的DNA探針，通過放射性信號的變化，實現PCR產物的特異性檢測。
但是普通的Taq DNA聚合酶22°C時仍然有很低速的核酸合成，大約為0.25核苷/秒/酶分子，也就是說引物還沒有正常配對，而酶已經催化了合成，會產生非特異性擴增。
基于Taq DNA聚合酶開發的熱啟動Taq DNA聚合酶，利用酶的修飾物在常溫下抑制DNA聚合酶的活性，加熱到變性溫度時修飾物失活，酶活得以釋放，從而使PCR反應正常進行，解決了PCR反應中引物二聚體產生或錯配引起的非特異性擴增等問題，提高了PCR反應的特異性。
濟凡生物Flash Robust HotStart DNA Polymerase （A210）是基于野生型Taq DNA聚合酶定向化改造得到的新型熱啟動酶，采用雙抗體封閉，有效防止錯配或引物二聚體引起的非特異性擴增，有效抑制探針降解產生的熒光信號下降，具有超高的擴增效率、較高的擴增靈敏度（可達個位拷貝數擴增）和特異性，具有較強的血液及PCR抑制劑耐受性。適用于各種基于Taq DNA Polymerase的熱啟動PCR、qPCR反應，可用于從復雜模板(基因組和cDNA)中擴增低拷貝基因，可用于血液直擴等直接擴增PCR。
以非瘟質粒為模板，進行9個10倍梯度稀釋，第9個稀釋梯度中質粒拷貝數濃度約為6 copies/2μl。對各稀釋梯度進行檢測，每孔模板使用量為2μl。可以看到，A210在寬廣的模板量區間內具有優秀的線性關系，可以輕松檢測出個位數拷貝的待測模板。
一、逆轉錄酶，分享該酶的特點和應用
逆轉錄（reverse transcription）是以RNA為模板合成DNA的過程，即RNA指導下的DNA合成。此過程中，核酸合成與轉錄（DNA到RNA）過程與遺傳信息的流動方向（RNA到DNA）相反，故稱為逆轉錄。逆轉錄過程由逆轉錄酶催化。
大多數逆轉錄酶都具有以下幾種活性。
①DNA聚合酶活性；
以RNA為模板，催化dNTP聚合成DNA的過程。逆轉錄酶的合成能力決定了產生的cDNA鏈的長短，一些基因工程改造的MMLV逆轉錄酶在單個結合位點中可以結合多達1,500個核苷酸，結合能力大概是野生型MMLV逆轉錄酶的65倍。
逆轉錄酶中不具有3'→5'外切酶活性，因此沒有校正功能，所以由逆轉錄酶催化合成的DNA出錯率比較高，基于MMLV的逆轉錄酶錯誤率在合成15,000到27,000個核苷酸中有一個錯誤核苷酸。
②RNase H活性；
由逆轉錄酶催化合成的cDNA與模板RNA形成的雜交分子，將由RNase H從RNA 5'端水解掉RNA分子。但是RNase H活性的存在可能降低逆轉錄效率，所以工程化的逆轉錄酶，通常會降低甚至消除RNase H活性，以提高cDNA合成效率。
③DNA指導的DNA聚合酶活性；
以逆轉錄合成的第一條DNA單鏈為模板，以dNTP為底物，再合成第二條DNA分子。
除此之外，工程化的逆轉錄酶都具備一定的溫度耐受性，有助于使具有堅固二級結構和/或高GC含量的RNA變性，使得逆轉錄酶能夠讀取序列，增加cDNA合成長度，提高合成效率。
GenFQ III Reverse Transcriptase是經過基因工程改造的新一代逆轉錄酶，大幅提高了熱穩定性，無RNase H活性。可以在42-55℃(高溫有利于打開RNA二級結構)條件下合成第一鏈cDNA，最佳反應溫度為50℃。具有靈敏度高、特異性高、聚合能力強、 熱穩定性強和半衰期長特點。該酶增強了與模板的親和力，適合少量模板以及低拷貝基因的逆轉錄。
合成效率為95.1%，證明cDNA的合成效率較高，而且RNA梯度稀釋線性關系良好。
熱穩定能力強，熱穩定7d對反轉錄效率無影響
二、Taq DNA聚合酶
PCR技術改變了現代分子生物學，而Taq DNA聚合酶改變了PCR。Taq DNA聚合酶是一種從Thermus aquaticm分離出的耐熱型DNA 聚合酶，主要應用在直接PCR、等位基因檢測、Sanger測序、TA克隆等領域。
Taq DNA聚合酶改具有良好的耐熱型，最適催化溫度在75-80℃，95℃半小時后仍保留50%以上的活性。Taq DNA聚合酶是少數具有5'-3'外切核酸酶活性的DNA聚合酶之一。能夠切除5’端放射性標記的DNA探針，通過放射性信號的變化，實現PCR產物的特異性檢測。
但是普通的Taq DNA聚合酶22°C時仍然有很低速的核酸合成，大約為0.25核苷/秒/酶分子，也就是說引物還沒有正常配對，而酶已經催化了合成，會產生非特異性擴增。
基于Taq DNA聚合酶開發的熱啟動Taq DNA聚合酶，利用酶的修飾物在常溫下抑制DNA聚合酶的活性，加熱到變性溫度時修飾物失活，酶活得以釋放，從而使PCR反應正常進行，解決了PCR反應中引物二聚體產生或錯配引起的非特異性擴增等問題，提高了PCR反應的特異性。
濟凡生物Flash Robust HotStart DNA Polymerase （A210）是基于野生型Taq DNA聚合酶定向化改造得到的新型熱啟動酶，采用雙抗體封閉，有效防止錯配或引物二聚體引起的非特異性擴增，有效抑制探針降解產生的熒光信號下降，具有超高的擴增效率、較高的擴增靈敏度（可達個位拷貝數擴增）和特異性，具有較強的血液及PCR抑制劑耐受性。適用于各種基于Taq DNA Polymerase的熱啟動PCR、qPCR反應，可用于從復雜模板(基因組和cDNA)中擴增低拷貝基因，可用于血液直擴等直接擴增PCR。
以非瘟質粒為模板，進行9個10倍梯度稀釋，第9個稀釋梯度中質粒拷貝數濃度約為6 copies/2μl。對各稀釋梯度進行檢測，每孔模板使用量為2μl。可以看到，A210在寬廣的模板量區間內具有優秀的線性關系，可以輕松檢測出個位數拷貝的待測模板。
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