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鼠尾光照測痛實(shí)驗(yàn)

瀏覽次數(shù):1160 發(fā)布日期:2022-4-8  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

尾閃試驗(yàn)( tail-flick test)也叫鼠尾光照測痛實(shí)驗(yàn),是一種用熱作刺激的急性傷害性知覺疼痛的實(shí)驗(yàn),即用熱刺激動(dòng)物(鼠類)的尾巴,當(dāng)其尾部受到傷害性刺激時(shí)會(huì)產(chǎn)生明顯的躲避反應(yīng),這是一種脊髓的屈曲反射。該疼痛模型最早由D'Amour和Smith在1941年描述,它可測試輕度麻醉的動(dòng)物而且不受動(dòng)物運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)性的影響,因而比熱板試驗(yàn)具有一定的優(yōu)越性,但是尾閃試驗(yàn)的尾巴溫度可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,容易造成假陽性或假陰性,試驗(yàn)最終的行為反應(yīng)也較為復(fù)雜(如舔其后爪)。Janssen等(1963)根據(jù)尾閃試驗(yàn)用溫水(49度)替代熱光源來刺激動(dòng)物的尾巴測試其反應(yīng)時(shí)間,更新的實(shí)驗(yàn)裝置則可用較局限的熱點(diǎn)刺激,專門刺激菜一個(gè)單一的腳爪,然后測定其反應(yīng)潛伏期,這比熱板試驗(yàn)刺激的4個(gè)全部的腳爪或尾閃試驗(yàn)刺激的尾部更為精細(xì)。

(一)實(shí)驗(yàn)材料

1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康成年雄性小鼠(30 - 35g)或大鼠(200 - 250g),分組飼養(yǎng)。

2.實(shí)驗(yàn)藥物生理鹽水(對照)與鎮(zhèn)痛藥物(如嗎啡,l0mg/kg,皮下注射)。

3.帶27((大鼠)或30G(小鼠)針頭的1.0ml注射器。

4.帶自動(dòng)計(jì)時(shí)器或秒表的尾閃試驗(yàn)裝置。

5.限制大鼠或小鼠活動(dòng)的包括毛巾或塑料小筒。

(二)實(shí)驗(yàn)步驟

1、從動(dòng)物房取出實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,稱重后,讓動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)30min,將對照組與實(shí)驗(yàn)組分開;

2、藥物準(zhǔn)備對照組(生理鹽水等)及給藥組(如嗎啡等,計(jì)算藥物濃度,如大鼠按2mg,kg紿藥,小鼠按10mg/kg給藥);

3、測定動(dòng)物的基礎(chǔ)反應(yīng)潛伏期( baseline latencies) 用尾閃試驗(yàn)測試儀(即在一小孔的平板下有一個(gè)發(fā)熱光源,將大鼠(尾尖部前50mm左右)或小鼠(尾尖部前約15mm)的尾部放在小孔的上方,啟動(dòng)發(fā)熱光源開始計(jì)時(shí),直到尾巴躲避為止,調(diào)整光源的強(qiáng)度,設(shè)大多數(shù)鼠的尾部躲閃時(shí)間在3- 4s,如果沒有躲避反射則把試驗(yàn)終止時(shí)間設(shè)定為10s,以免燒傷;

4、藥物注射將不同的藥物包括對照溶液,隨機(jī)順序注射到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)。注意計(jì)算好給藥時(shí)間與試驗(yàn)測試的時(shí)間間隔,試驗(yàn)持續(xù)時(shí)間,同時(shí)給出足夠的機(jī)動(dòng)時(shí)間(如實(shí)驗(yàn)記錄,藥物更換等),必要時(shí)讓另外的人注射對照劑或?qū)嶒?yàn)藥品(盲法試驗(yàn));

5、在給藥后15,30及60min時(shí),即測試尾閃反應(yīng),將動(dòng)物放到尾閃測試板并把其尾部放到光源小孔上,即開始計(jì)時(shí),觀察動(dòng)物尾部躲避反應(yīng)的時(shí)間,或直到終止(cut-off)時(shí)間。注意一次試驗(yàn)只測1個(gè)時(shí)間點(diǎn),而不是3個(gè)時(shí)間點(diǎn);

6、將動(dòng)物放到尾閃測試儀上到反應(yīng)出現(xiàn)時(shí)的潛伏期或終止實(shí)驗(yàn)時(shí)間記錄下來,在所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物完成測試后(一般每組至少8個(gè)數(shù)據(jù)),分組將其平均并作統(tǒng)計(jì)學(xué)評估。

尾閃試驗(yàn)時(shí),也常用到一種稱為最大可能效應(yīng)百分比(percent max.mum possible effect,MPE,%),即:MPE(%)=[(給藥后一基礎(chǔ)反應(yīng)),(終止時(shí)間一基礎(chǔ)反應(yīng))] x 100這里基礎(chǔ)反應(yīng)與給藥后均指反應(yīng)潛伏期,所有動(dòng)物在測試前,應(yīng)該先測定一下它的反應(yīng)潛伏期(基礎(chǔ)反應(yīng)反應(yīng)潛伏期);給藥后反應(yīng)潛伏期是指動(dòng)物接受藥物(包括對照用生理鹽水或其他載體)注射(或灌注)后實(shí)驗(yàn)中的反應(yīng)潛伏期;終止時(shí)間是指給藥后動(dòng)物不能對熱作出反應(yīng)而終止試驗(yàn)的時(shí)間(10s)。

(三)注意事項(xiàng)

1、如果給藥前或?qū)φ战M動(dòng)物測不到反應(yīng)或反應(yīng)潛伏期很靠近試驗(yàn)終止時(shí)間,說明刺激強(qiáng)度太弱(光源溫度設(shè)定較低),必須加大刺激強(qiáng)度。

2、必須保持所有的實(shí)驗(yàn)程痔一致,盡量輕巧抓取動(dòng)物,讓動(dòng)物有足夠的時(shí)間適應(yīng)實(shí)驗(yàn)者的氣味及實(shí)驗(yàn)室環(huán)境,否則可造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果的明顯波動(dòng)或不能重復(fù)。

3、刺激光源的強(qiáng)弱,即刺激的強(qiáng)度太高或太弱均可使試驗(yàn)結(jié)果變化較大,而且高強(qiáng)度的刺激可能掩蓋實(shí)驗(yàn)藥物的效果,因此,用藥前的基礎(chǔ)測試非常重要。

4、為了減少實(shí)驗(yàn)的誤差,一般適量限制動(dòng)物的活動(dòng),如用毛巾裹住動(dòng)物或把它們放入小筒中,這兩種方法掌握不當(dāng)都可造成動(dòng)物的壓抑( stress)行為而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
 

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