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CHO細胞培養中乳酸產物的產生機理及影響

瀏覽次數:7065 發布日期:2021-8-23  來源:蘇州阿爾法生物官網

CHO細胞培養廣泛應用于細胞工程,基因制藥等領域。主要用于基因改造、重組蛋白等規;糯笊a工藝中。
在細胞培養過程中,有些產物對細胞有一定的毒害作用。比如:常見的副產物乳酸以及NH4+這兩種物質,是CHO 細胞培養過程中常見的有害產物。只有掌握其產生機理才能在細胞培養過程中避免或減少這些物質的產生。


細胞生長過程中乳酸的產生機理
CHO細胞生長過程中的產生的乳酸主要有兩種即:D-CH3和 L-CH3。在CHO細胞的對數生長期, 隨著細胞的快速增殖,CHO細胞產物也會不斷地積累,其中CH3和 NH4+ 會有明顯的變化。乳酸產物的多少與丙酮酸濃度、乳酸代謝速度以及NADH/NAD+的含量所決定。



從乳酸生成的角度來看,丙酮酸是產生乳酸的主要來源。那么丙酮酸又是怎么來的呢?


CHO細胞培養過程中,丙酮酸的主要來源有三個:
1. 來源于培養基中。CHO培養基中的營養成分可以達到50-100種,其中丙酮酸成分雖然可以 作為細胞培養中的替代碳源,但容易形成L-CH3。所對于CHO培養一般不建議使用含丙酮酸鈉的培養基。
2. 來源于糖酵解。培養基中的葡萄糖經過糖酵解過程形成丙酮酸再通過NADH/NAD+途徑代謝產生L-型乳酸,這樣高濃度乳酸不利于CHO 細胞的生長。所以,部分培養基生產商使用半乳糖來替葡萄糖或者通過限制葡萄糖 濃度 或補充其他碳水化合物來控制乳酸的形成。
3. 來源于丙氨酸等營養成分。丙氨酸在脫氨基的作用 也會生成丙酮酸和NH4+等產物。這些成分也會參與進一步的酶化反應產生乳酸,并伴隨細胞的生長而累積。


丙酮酸的代謝途徑
CHO細胞培養過程中丙酮酸進入TCA循環的量 一般很少,多數會通過NADH/NAD+的方式進入丙酮酸--乳酸--丙酮酸的循環。當乳酸產物濃度增高就造成乳酸累積,今兒影響到CHO 細胞的生長狀態。


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發布者:蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司
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