病毒性肺炎（viral pneumonia）是由病毒侵犯肺實質(zhì)細胞而造成的肺部炎癥，常由上呼吸道病毒感染向下蔓延引起。隨著呼吸道病毒檢測技術的進步，病毒性肺炎的發(fā)病率和死亡率逐漸得到認識，研究人員發(fā)現(xiàn)流感病毒感染占病毒性肺炎患者的大多數(shù)。流感病毒是季節(jié)性流感和偶發(fā)性流感大流行的病原體。世衛(wèi)組織估計，流行病每年導致約300-500萬嚴重病例，全球約有29萬-65萬人死于呼吸道疾病。目前流行的季節(jié)性流感病毒包括A型的H1N1和H3N2以及B型。已有報道指出，平均每個季節(jié)由B型流感病毒引起的病例占流感相關死亡的29%，而在B型流感高發(fā)期，這一比例高達95%。
 

目前，治療流感病毒感染的藥物主要有兩種，分別是M2離子通道阻滯劑(金剛烷胺、金剛乙胺)和神經(jīng)氨酸酶抑制劑NAIs(奧司他韋、扎那米韋、帕拉米韋和拉尼米韋)。由于廣泛耐藥的出現(xiàn)和對B型流感病毒缺乏療效，M2離子通道阻滯劑不再推薦使用；因此，NAIs成為抗病毒藥物的主要類別。然而，耐NAIs突變體的出現(xiàn)仍會降低其療效。因此，對耐NAIs突變體的研究變得至關重要。
 

近日，中國疾病預防控制中心病毒病預防控制所國家流感中心（世界衛(wèi)生組織流感參比和研究合作中心）等聯(lián)合在《Virology》發(fā)表了名為Effectiveness of favipiravir (T-705) against wild-type and oseltamivir-resistant influenza B virus in mice的文章。Favipiravir法維吡韋也稱為T-705，靶向流感病毒的RNA依賴的RNA聚合酶RdRp，可抑制A，B和C型流感病毒，包括耐奧司他韋的菌株。該研究在其基礎上檢測了T-705對耐奧司他韋B型流感的功效。

在這項研究中，研究人員使用致死小鼠模型評估了T-705對野生型和耐奧司他韋的乙型流感病毒的影響。此外還評估了體內(nèi)藥物治療后是否發(fā)生了誘導對T-705敏感性降低的突變。結果顯示T-705以劑量依賴的方式保護小鼠免于致命感染。T-705還能顯著降低病毒載量和抑制肺病理學。此外，表型分析顯示T-705耐藥病毒在T-705處理后沒有出現(xiàn)，即T-705可以有效地保護小鼠免受野生型和對奧司他韋具有耐藥性的B型流感病毒的致命感染。
 

文中使用Naica Crystal Digital PCR系統(tǒng)評估了T-705對野生型和耐奧司他韋的小鼠呼吸道病毒載量的影響，具體為測定了小鼠肺部、鼻甲骨、氣管（對應下面兩幅圖的C/E/F）中流感病毒的非結構蛋白1 (NS1)基因拷貝數(shù)。
 

法國Stilla Technologies Naica數(shù)字PCR平臺是實現(xiàn)DNA/RNA絕對定量的技術工具，自動生成和組裝單層平鋪的微滴，進行單分子PCR擴增，通過高分辨率的三色熒光通道檢測，自動QC質(zhì)控，識別三色熒光中有效的陰陽性微滴，從而達到目的DNA/RNA的絕對定量檢測。同時提供原始數(shù)據(jù)、單微滴追溯等功能，確保數(shù)據(jù)真實可靠。
 

◐ 只需一步加樣操作，無需標準品和標準曲線是真正的絕對定量系統(tǒng)。通過對模板的有限稀釋，耐受抑制劑能力強，更有利于臨床、環(huán)境等復雜樣本的檢測。

◐ 有效微滴：25000~30000/樣本，實現(xiàn)低濃度、低豐度的核酸樣本進行準確定量。

◐ 封閉式芯片設計，樣本間獨立，避免了加樣交叉污染風險，同時防止擴增后的氣溶膠污染，保證結果安全可靠和實驗環(huán)境安全。