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DNA損傷的三種分子生物檢測方法

瀏覽次數(shù):18906 發(fā)布日期:2020-1-7  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

DNA是攜帶生物體遺傳信息的重要分子,它的完整性對細(xì)胞存活至關(guān)重要。然而,在生命活動中,DNA時刻遭受著內(nèi)源性(氧化自由基、復(fù)制叉崩塌等)或外源性(電離輻射、烷化劑等)刺激,DNA損傷不可避免。

檢測DNA損傷的方法有很多,根據(jù)其原理大致可以分為3類: 基于損傷DNA理化性質(zhì)的改變檢測DNA損傷、基于分子雜交檢測DNA損傷以及基于DNA損傷后形成的產(chǎn)物檢測DNA損傷。前兩種方法是基于熒光標(biāo)記直接觀測DNA的損傷情況,而基于DNA損傷后形成的產(chǎn)物檢測DNA損傷是通過標(biāo)記物的檢測間接反映DNA的損傷程度。

檢測原理 檢測技術(shù) 所檢測DNA損傷類型
基于損傷DNA理化性質(zhì)的改變檢測 彗星實驗 鏈斷裂及堿不穩(wěn)定位點
基于分子雜交檢測 熒光原位雜交法 鏈斷裂
基于DNA損傷后形
成產(chǎn)物檢測
yH2AX 鏈斷裂
8-OHdG DNA化學(xué)修飾
TUNEL 細(xì)胞凋亡所致DNA鏈斷裂

※ 基于DNA損傷后形成產(chǎn)物進(jìn)行檢測

DNA損傷過程中可形成某些特定的損傷產(chǎn)物,可通過檢測損傷產(chǎn)物(磷酸化H2AX、8-OHdG等)來評估DNA損傷。也可標(biāo)記損傷DNA,如末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的脫氧尿苷三磷酸標(biāo)記(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL),通過標(biāo)記物的檢測間接反映DNA的損傷程度。

1.雙鏈斷裂標(biāo)志物磷酸化H2AX檢測法

H2AX是組蛋白H2A家族成員之一,包含一個進(jìn)化保守區(qū)域SQ位于真核細(xì)胞的C末端,分子量為14KD,139位有個絲氨酸殘基,在細(xì)胞發(fā)生DNA雙鏈斷裂后的數(shù)分鐘內(nèi),將會被ATM,ATR和PRKDC磷酸化,形成γH2AX,進(jìn)而迅速招募DNA修復(fù)蛋白和凋亡蛋白到損傷部位,每個雙鏈的斷裂區(qū)會有成百上千的γ-H2AX,然后在1h左右數(shù)量和密度達(dá)到峰值。由于γH2AX的出現(xiàn)與DNA雙鏈斷裂緊密關(guān)聯(lián),是目前國內(nèi)外研究細(xì)胞DNA雙鏈斷裂應(yīng)激反應(yīng)的熱點之一,同時也可以作為DNA雙鏈斷裂的標(biāo)志物。

由于與DNA雙鏈斷裂緊密相關(guān),γH2AX可以作為雙鏈修復(fù)的標(biāo)志物,艾美捷可為您提供完備的H2AX檢測產(chǎn)品:

γH2AX檢測試劑盒:

貨號 名稱 描述 規(guī)格
P-6001-096 EpiQuik In Situ DNA Damage Assay Kit
原位DNA損傷檢測試劑盒
通過原位檢測磷酸化H2AX Ser139評估DNA損傷 96 assays

 

H2AX&γH2AX相關(guān)抗體:

類型 貨號 名稱 應(yīng)用
H2AX抗體 MAB20144 H2AFX monoclonal antibody, clone BIA-8 WB-Ce、IHC-P、ICC、IF、IP
MAB12802 Histone H2AX monoclonal antibody, clone RM214 WB-Ce、ICC、ELISA
PAB8764 H2AFX polyclonal antibody WB-Ce、IHC、IP
γH2AX抗體 MAB15279 Histone H2AX (phospho S139) monoclonal antibody, clone 2A9-B5 WB-Ce、IF
MAB15111 Histone H2AX (phospho S139) monoclonal antibody, clone RM224 WB-Ce、ICC、IF
MAB21809 H2AFX (phospho S139) monoclonal antibody WB、 IHC-P、 IF、 IP

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2.氧化損傷標(biāo)志物8-OHdG檢測法

DNA氧化損傷產(chǎn)物中,作為DNA中脫氧鳥苷(dG)的羥基加合物,8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)因其形成量大,影響因素少,已被公認(rèn)為最能反映體內(nèi)DNA氧化損傷程度的生物標(biāo)志物。

OHdG檢測試劑盒:

貨號 名稱 規(guī)格
P-6003-48 EpiQuik 8-OHdG DNA Damage Quantification Direct Kit (Colorimetric)
8-OHdG DNA損傷定量檢測試劑盒(比色法)
48 assays
P-6003-96 96 assays

 

8-OHdG相關(guān)抗體:

貨號 名稱 應(yīng)用
MAB6116 8-OHdG monoclonal antibody, clone N45.1 IHC

3.DNA斷片標(biāo)記法

原位末端標(biāo)記法(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)是一種檢測凋亡細(xì)胞DNA鏈斷裂片段的方法。細(xì)胞凋亡發(fā)生時,內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶將DNA降解成片段,在脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶的作用下,底物dUTP 或BrDU(無或有熒光標(biāo)記)可連接到DNA斷片的3-OH末端,采用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀對標(biāo)記物進(jìn)行分析,實現(xiàn)在單細(xì)胞水平檢測凋亡細(xì)胞的DNA碎片。

貨號 名稱 樣本類型
KA0773 In Situ BrdU DNA Fragmentation Assay Kit 細(xì)胞、組織
KA0775 In Situ BrdU DNA Fragmentation Assay Kit (IHC) 細(xì)胞、組織
KA0776 In Situ BrdU DNA Fragmentation Assay Kit (Red) 細(xì)胞、組織

艾美捷科技與國內(nèi)外優(yōu)秀的生物試劑供應(yīng)商保持著密切的合作關(guān)系,目前已成為眾多國際知名品牌的中國總代理或一級代理,主要包括:Abbkine、Origene、AAT Bioquest、開曼生物、Abnova 、Biovision、ProSpec、Hycult Biotech 、Equitech-Bio、Alomone Labs、Epigentek、ImmunoReagents 、Jackson、SouthernBiotech、US Biological 、Caisson Labs等,可以在第一時間為用戶提供最前沿的專業(yè)資訊、完備的產(chǎn)品及物流服務(wù)。 

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