來自德國克勞斯塔爾理工大學的科學家們在2019年第7期的《Processes》雜志上發表了題為“Accelerating Biomanufacturing by Modeling of Continuous Bioprocessing - Piloting Case Study of Monoclonal Antibody Manufacturing”的文章。

文中，研究人員對基于CHO細胞的、產量1 L/天細胞上清液，即約150g/年產物（單克隆抗體）的中試規模連續生物工藝進行了可行性實驗研究和模型驗證。實驗時長約6周，包括準備、啟動、批次及維持至少兩周的連續穩態操作和純度及產量的最終分析。實驗在使用交替式切向流過濾（ATF）進行灌流培養之后，成功進行了包括水兩相提取（ATPE）、超濾/洗濾（UF/DF）、含離子交換（IEX）和疏水作用（HIC）柱的的整合式逆流層析（iCCC）純化以及凍干的連續工藝處理。實驗及建模證實，連續操作穩定且可行。

在細胞培養中，實驗使用中國倉鼠卵巢細胞（CHO DG44）生產單克隆抗體。培養條件為36.8℃、pH 7.1、60% pO₂、433rpm，培養在Sartorius Biostat B 2L生物反應器內進行，使用無血清化學限定培養基。

對于連續培養，使用交替式切向流過濾（ATF）灌流系統，進行細胞截留。灌流在活細胞密度達到2x10^6cells/mL時開始。在整個連續培養過程中維持體積置換率為1VVD。通過原位濁度探針，將活細胞濃度維持恒定為特定細胞濃度。

在高活性時（＞95%），濁度可用于在線監測活細胞濃度。所以，使用在線濁度閾值來進行在線控制。操作點（4800FAU）被選擇用于活細胞濃度控制，其代表的活細胞濃度為25x10^6cells/mL。當濁度超過閾值時，自動觸發廢棄（bleeding）泵。濾液和廢棄液流速之和等于補液流速，以維持培養體積。ATF泵置換體積為80.14mL，當其以每分鐘1個泵循環運行時（一個循環定義為真空排氣并加壓置換整個泵體積），ATF流速為160 ml/min，此時可達到ATF比例為200.35（濾液體積流速和ATF流速之比）。

結果顯示，灌流培養達到的抗體濃度為0.34±0.05g/L（批次階段結束時）、0.70±0.06g/L（穩態開始時）以及0.50±0.03g/L（培養240小時時）。較低的產物濃度是由于相比傳統灌流培養（14-60天），實驗中工藝的培養時間較短。但是，即使在較低的產物濃度條件下，單位體積產量仍達到了700.34±56.85mg/L/d（穩態開始時）和503.20±28.45mg/L/d（培養240小時時）。高產率以及其它工藝特性（如更低的投資支出、長期的連續培養）增加了灌流系統的吸引力。

詳細實驗內容，請參考原文。