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溶酶體熒光探針原理介紹

瀏覽次數:2873 發布日期:2019-6-30  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
溶酶體熒光探針​
      溶酶體為單層膜蛋白包圍的內含一系列酸性水解酶的小體。溶酶體中含有多種酶,如糖苷酶、酸性磷酸酶、彈性蛋白酶、組織蛋白酶等等,是物質代謝的場所。
      弱堿性胺選擇性聚集在胞內低pH值的小室中,可用于研究溶酶體的生物合成和發病機理。其中最常用的就是DAMP,它不發熒光,需要和抗DNP的抗體共同使用,來觀察染色模式。中性紅、吖啶橙等熒光探針也常用于酸性細胞器的染色,不過它們缺乏特異性。
       LysoTracker探針就是Invitrogen開發的向酸性熒光探針,用于標記和追蹤活細胞中的酸性細胞器。這些探針有幾個重要的特征:對酸性細胞器的高選擇性,在納摩爾濃度下能對活細胞有效標記。而且,LysoTracker探針有幾種不同的顏色,適合多色標記。
       LysoTracker探針是細胞膜通透性的,一般聚集在球形的細胞器中。研究人員發現探針在極低濃度(~50 nM)下選擇性最佳。此外,較大的酸性細胞器在LysoTracker Red DND-99染色后,經過甲醛固定仍保留其染色模式。
對于那些想研究溶酶體生物發生動力學的研究人員來說,LysoSensor探針可謂量身定做。                LysoSensor染料是向酸性的探針,由于質子化作用聚集在酸性細胞器中。質子化也緩解了染料的熒光淬滅,使熒光強度增加。因此,LysoSensor在酸化的環境中表現出pH依賴的熒光強度增加,而LysoTracker探針的熒光則沒有明顯變化。
        Invitrogen提供了5種LysoSensor試劑,pKa不同,顏色各異。LysoSensor Blue DND-167和LysoSensor Green DND-189的pKa值很低,處于酸性環境中才會發出熒光,而LysoSensor Green DND-153在中性pH下就發出很強的熒光。LysoSensor Yellow/Blue DND-160很特別,具有雙激發和雙發射峰,是pH依賴的。在酸性細胞器中,它主要發黃色熒光,而在弱酸性細胞器中,熒光則為藍色。LysoSensor Yellow/Blue DND-160曾與fluo-3 AM共用,來同時測量兔胃腺中H+ 和Ca2+,以確定類膽堿和cAMP依賴通路激活后胃酸分泌的動力學。
除了上面這些傳統的熒光探針,Invitrogen的Organelle Lights?熒光蛋白也是一個不錯的選擇。Organelle Lights是即用型的熒光蛋白載體,融合了信號肽,能將表達的熒光蛋白定位到亞細胞器中,如核、質膜、內質網、高爾基體和過氧化物酶體等等。顏色有青、綠、橙、紅幾種。它通過改造的可用于哺乳動物細胞的桿狀病毒(BacMam virus)將熒光蛋白導入胞內,不僅安全,而且適合多種細胞類型,包括原代細胞和神經細胞。你只需要將試劑加到細胞中就行了,既不需要轉染,也不需要對細胞做任何處理,用起來相當方便。
      LysoTracker Green DND-26 溶酶體綠色熒光探針 可被活細胞極快速地吸收;加入染料后 1 至 5 分鐘即可達到最佳成像效果  Ex/Em:73/422, 樣本類型:活細胞
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發布者:南京沃博生物科技有限公司
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