做western blot印跡膜時，較大的蛋白質眾所周知是難以處理的。 特別是，您可能很難實現良好的轉印效率。 在某些方面，蛋白質難以朝著你想要的方向前進。

我們將給5點建議，幫助膠上大分子量蛋白的轉印。

01

犧牲膠的韌性來提高效率

低濃度的丙烯酰胺凝膠可能難以操作。一旦手指觸摸它就會撕裂？ 但是，與高濃度的凝膠相比，大蛋白將更有效地從較低濃度的凝膠中移出（分辨率更好）。因此，提高你的靈活性和耐心，嘗試6-7.5％的凝膠。 或者可以嘗試使用梯度凝膠，可以同時分辨小分子量和大分子量蛋白質。

02

去除去垢劑

較大的蛋白質可能在凝膠中沉淀，抑制轉印。 在SDS-PAGE期間添加的SDS通常會解決這個問題，但較大的蛋白質可能需要更多的SDS。 您可以在轉印緩沖液中添加最多0.1％的SDS以阻止沉淀的產生。因為SDS抑制蛋白質與膜的結合，因此請嘗試從低濃度的SDS開始（例如0.0375％），然后逐步提高。

如果確實在轉印緩沖液中添加了SDS，則需要重新優化其他轉印條件，如轉印時間和電流，以防止蛋白透過膜。

03

降低甲醇濃度

甲醇與SDS具有相反的作用。 雖然甲醇增加蛋白與膜的結合，但它從蛋白質中剝離SDS。 因此，降低轉印緩沖液中的甲醇濃度也有助于防止蛋白沉淀。 您可以將濃度降低到10％或更低。 如果您使用的是PVDF膜，則可以完全省去甲醇。 在使用之前，不要忘記用甲醇將膜激活！

甲醇也會導致凝膠收縮，所以如果減少甲醇，你的凝膠會膨脹得更多。 這也有助于轉移大分子量蛋白。 但您可能需要使用比正常情況稍大的濾紙和膜。

04

慢速轉印大分子量蛋白

大分子量蛋白想要獲得良好的轉移效率可能需要更多時間。 快速移動那些大分子可能很困難。 嘗試以較低的電壓過夜轉印。 只是不要忘記保持轉印要在低溫環境！

05

使用濕轉

雖然半干轉印可能更適合設置并且需要較少的緩沖液，但它確實有其缺點。 半干轉印通常比濕轉移效率低，并且不能增加轉印時間以適應更大的蛋白。 轉移大蛋白時最好堅持使用濕轉。