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總蛋白染色劑替代麗春紅S用于熒光Western Blots的優(yōu)勢(shì)

瀏覽次數(shù):10365 發(fā)布日期:2018-10-22  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

麗春紅S是一種快速,可逆的蛋白質(zhì)染色劑,通常用于確認(rèn)蛋白樣品是否成功地從凝膠轉(zhuǎn)移到膜上,然后研究人員進(jìn)行免疫印跡過程。 轉(zhuǎn)印后對(duì)膜進(jìn)行染色可以在用抗體孵育印跡之前快速且容易地識(shí)別一些轉(zhuǎn)印的問題,例如由于存在氣泡而導(dǎo)致的條帶不完全、不均勻的轉(zhuǎn)移和偽影。 此外,染色膜上的總蛋白為總蛋白標(biāo)準(zhǔn)化定量提供了標(biāo)準(zhǔn)。
然而,盡管麗春紅染色是可逆的,但它與熒光Western印跡檢測(cè)不相容。 即使在徹底脫色后,麗春紅染色也會(huì)在膜上留下自發(fā)熒光殘留物,增加背景熒光。
下圖顯示了多色熒光蛋白印跡。 右半部分使用麗春紅染色,然后在免疫印跡前進(jìn)行脫色。


 
然后用Azure Fluorescent Blot Blocking Buffer封閉兩半印跡膜,并使用如圖中標(biāo)記的四種不同熒光探針檢測(cè)四種蛋白。使用Azure cSeries RGB模塊對(duì)印跡進(jìn)行成像, 盡管徹底脫色,但在用麗春紅染色的一半印跡上看到非常高的熒光背景。
下圖顯示使用Azure cSeries NIR模塊拍攝的相同印跡,該模塊評(píng)估了700nm和800nm通道。 在NIR成像印跡中熒光背景減少,但與未染色的一半印跡相比仍然具有高背景。

為避免由于麗春紅染色導(dǎo)致的高背景,可考慮使用其他總蛋白質(zhì)染色劑.2 AzureRed熒光總蛋白染色與下游Western印跡檢測(cè)完全兼容,包括熒光檢測(cè)和下游質(zhì)譜。
AzureRed熒光蛋白染色是熒光western blotting定量的理想選擇。寬廣的線性動(dòng)態(tài)范圍確保AzureRed成為解決蛋白上樣變化的有效標(biāo)準(zhǔn)。 AzureRed的一個(gè)關(guān)鍵特性是將其融入現(xiàn)有western blotting工作流程的簡(jiǎn)單性(圖3)。
圖3.使用azurered進(jìn)行的總蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)化很容易適合任何蛋白質(zhì)印跡工作流程
 
AzureRed染料可與常用熒光探針同時(shí)檢測(cè),無干擾,允許在一張印跡膜上評(píng)估多種蛋白質(zhì)。使用AzureRed可以進(jìn)行多色印跡的總蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)化,不需要?jiǎng)冸x和脫色,可以在一張印跡膜上定量多種蛋白(圖4)0。 該方法快速,可以與感興趣蛋白一同成像。有關(guān)AzureRed熒光蛋白染色的更多信息,請(qǐng)?jiān)L問www.azurebiosystems.com。
 

圖4.AzureRed與三種感興趣的蛋白同時(shí)成像。 

向凝膠中加入稀釋的HeLa細(xì)胞裂解物。轉(zhuǎn)印后,將印跡用AzureRed染色,然后在不脫色情況下加入tubulin,ß-actin和GAPDH探針。用Sapphire 雙模式多光譜激光成像系統(tǒng)掃描成像。四個(gè)通道進(jìn)行疊加,總蛋白質(zhì)(AzureRed染色)以灰色顯示;tubulin-紅色,ß-actin-藍(lán)色和GAPDH-綠色

發(fā)布者:艾普拜生物科技(蘇州)有限公司
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標(biāo)簽: 麗春紅 western blot
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