前言:

制備高質(zhì)量的病理切片需要一定的技巧和經(jīng)驗。

該教程的目的是協(xié)助初學(xué)者熟悉石蠟切片的制備，以及作為經(jīng)驗更豐富的技術(shù)專家的進修課程。涵蓋輪轉(zhuǎn)式切片機制備石蠟切片的設(shè)置和操作相關(guān)的基本內(nèi)容。同時對切片過程中的部分常見故障進行具體說明，并提供故障排除建議。

06 設(shè)定最佳刀片間隙角

刀片間隙角可調(diào),必須進行恰當設(shè)定以達到最佳性能。

間隙角可防止刀面和蠟塊表面接觸。

切面角是形成切削刃的兩個切面之間的角度。對于常規(guī)使用的刀片和可調(diào)換式刀片,切面角大約為35°°,但該角度可能因刀片類型和制造商的不同而發(fā)生

因此,必須針對每種刀片類型設(shè)定最佳間隙角。

在進行角度設(shè)定時,應(yīng)遵循切片機制造商指南。對于Leica生物系統(tǒng)的刀片和刀片架,推薦的設(shè)定角度為1至5°

07刀片最長使用壽命

采用一些簡單的策略可使每個刀片均達到最長的使用壽命。

清潔刀片時,避免沿刀刃拖動任何物品。即使是纖維素纖維亦可以對刀片造成損壞。

避免刀刃接觸任何硬質(zhì)物體,如鉗子或刷子。

有條不紊的使用刀片,從一端工作至另一端。這將使刀片的每一部分均達到最大使用壽命。

使用刀片的一部分進行修塊,使用另一部分進行最終切片,或者使用獨立刀片進行此兩個步驟。

回縮式切片機可在刀片上行運動過程中使蠟塊與刀片脫離接觸,從而使刀片壽命最大化,且可防止刀片復(fù)位過程中產(chǎn)生碎片。

08確定定向蠟塊

切割沖程中蠟塊與刀片的定向可以影響獲取帶狀物的難易程度,并可直接影響切片的質(zhì)量。

在大多數(shù)實驗室,所有包埋盒均按照相同的方向被置于樣本夾上(如東-西方向且標簽向左,或北南方向且標簽向上)。這樣處理的目的在于在制備高質(zhì)量切片之前對多個蠟塊進行粗修,并允許對組織進一步切割或再切割。且不會造成組織損耗過大。因此,在包埋階段即必須考慮到蠟塊與刀片的相對方向,此要求經(jīng)常被忽視。

圖A為部分典型蠟塊的最佳取向。針對特定的蠟塊類型,何種取向為最佳可能存在不同意見,但必須意識到取向的重要性并加以考慮。

例A.腸:刀片持續(xù)性通過粘膜

例B子宮頸:最好是將組織致密處呈遞至刀片,而非直邊。

例C皮膚:刀片持續(xù)性通過表皮

切片機(如RM2235)還配備有可進行校準控制的精密定位裝置,可以在x/y軸上很容易找到零點或可測量的變量。此項功能非常有助于對其他實驗室制備的蠟塊或已經(jīng)過其他切片機切割的蠟塊進行再切割,因為其需要精確對齊以防止不必要的組織損失。同時對多個蠟塊進行切割時應(yīng)常規(guī)使用,重要的是在開始切割之前夾持架應(yīng)被設(shè)定至x/y軸的零位置。通過采用指示器(紅色)、切口點(點擊停止)和指示標記即可非常容易地實現(xiàn)此設(shè)定。

（圖A）

09了解切片機的設(shè)計特點及其使用方法

回縮式切片機的設(shè)計理念在于標本上行沖程中回縮,讓蠟塊遠離刀片。重要的是要知道您所使用的切片機是否具備此功能。

回縮是切片機的設(shè)計特點之一,可在切片過程中提供獨特的優(yōu)勢并可延長刀片壽命。

當使用回縮式切片機時,蠟塊下行沖程中必須將蠟塊表面對齊刀口(即處于前出位置,而非退縮位置)。

當標本夾處于退縮位置時,如果蠟塊仍然與刀口非常接近,在手輪下一次完整旋轉(zhuǎn)時,蠟塊將前出,前出量為退縮量+選定的切片厚度。這將導(dǎo)致切片厚度增加,并可能導(dǎo)致?lián)p壞蠟塊和刀片。

切片機也可以手動、半自動或全自動。

自動化設(shè)備可減少重復(fù)動作,而這些動作可能導(dǎo)致肌肉骨骼疾病。

10“修塊”、“表面加工”或“初步加工”時應(yīng)注意

切片機的該階段需要非常小心，因為樣本表面具有診斷學(xué)意義的組織很容易丟失或損壞。

在您開始修塊之前,請務(wù)必確保所有的夾持機械均已得到安全加固。

正確修塊的目的在于將組織保守暴露至一定水平,在該水平可以獲得目標性切片。

當厚度為10至30μm時,通常應(yīng)進行修塊。

對脆性組織進行快速粗修可能破壞標本表面。在30μm厚度使用機械修塊設(shè)備時應(yīng)特別注意。

最后一步則通過輕柔切割少許薄切片對蠟塊進行磨光。

在對蠟塊進行修塊之前,持刀架底部夾架A、側(cè)向位移夾B和x-y定位夾C均應(yīng)該牢固鎖定。如果不執(zhí)行此操作,可能會損壞蠟塊和刀片。

當進行初步加工時,機械修塊設(shè)備時應(yīng)謹慎使用,尤其是較低)設(shè)定被激活時可導(dǎo)致30μm的前出。

當初步加工時,粗進刀輪需要謹慎使用,以避免從樣品表面意外切割較厚切片并造成損害。

11考慮切片厚度的影響因素

按照需要設(shè)定切片機,但請注意,有許多因素均可影響實際的切片厚度。

4μm厚的粘性切片會比2μm厚的嚴重破壞切片提供更多的信息。

當對冷凍蠟塊進行切片時,條帶中第一對切片的實際厚度可能比預(yù)期值厚。主要原因是由于熱膨脹(請參見下文第1、2和3節(jié))。

其他因素，如旋轉(zhuǎn)速度、間隙角設(shè)置和刀刃的情況,均會影響獲得的實際切片厚度。

12確保蠟塊冷凍

當標本和石蠟的硬度匹配良好時,切片質(zhì)量通常可得到改善。正是由于該原因,大多數(shù)石蠟塊在切片時必須冷凍。用于冷凍蠟塊的方法亦非常重要。

冷凍石蠟可為標本中的較硬成分提供更好的支持,以獲得更薄的切片。

將蠟塊置于冷卻臺或濕冷表面,持續(xù)幾分鐘(比如融冰的表面)。

水將小幅度滲透進入蠟塊,使組織腫脹,因此更適合進行切片。對于過度脫水、過度干燥或易碎的組織,這將非常重要。

如果組織與周圍石蠟存在接觸不良,將蠟塊置于冰箱中會導(dǎo)致此處的表面開裂,可能更難以獲得粘性切片。

左邊的切片源自于一塊未進行冷凍的溫度相對較高的蠟塊。右邊的切片源自于一塊相同、但在融冰表面進行了冷卻的蠟塊。

以上便是本期教程內(nèi)容。該教程列出的切片機照片為RM2235手動切片機，但所提供的建議和意見均可應(yīng)用于最先進的輪轉(zhuǎn)式切片機。本期教程已結(jié)束，敬請期待下期《石蠟切片的制備指南（下）》。

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