NF-κB(p65)/ NF-κB(p50)活性分析試劑盒原理及應用介紹
NF-κB/Rel轉錄因子家族包含幾種結構相關的蛋白（p65/p105,p52/p100,RelA(p65),c-Rel/ NF-κB)形成同源和/或異源二聚體。該轉錄因子家族成員調控超過150種目的基因，包括炎癥細胞因子、趨化因子、免疫受體、細胞粘附分子等的表達。正因為如此，NF-κB被認為是“免疫應答的中心調節物”。作為二聚體，這些轉錄因子與DNA序列結合（這些結合位點被稱為“κB位點”），從而調節目的基因的表達。在大多數細胞中，NF-κB/Rel轉錄復合物以未活化的形式存在于胞漿中，與抑制劑IκB結合。當細胞受到刺激后，一些列的磷酸化、泛素化反應導致IκB降解，NF-κB轉錄因子進入細胞核。
由于NF-κB轉錄因子在人類炎癥反應和其他疾病中的重要作用，吸引了越來越多研究者的目光，而細胞中NF-κB各亞基活性的檢測是NF-κB研究中必不可少的一步！
怎樣安全、方便、有效的檢測細胞中NF-κB各亞基活性呢？
艾美捷給出了答案：NF-κB (p65) Transcription Factor Assay Kit（貨號：10007889）及NF-κB (human p50) Transcription Factor Assay Kit（貨號：10006912）。在前期的樣本處理中，還可以使用細胞核提取試劑盒（Nuclear Extraction Kit，貨號：10009277）。
微孔板預先包被含有NF-κB結合位點的dsDNA寡核苷酸，加入細胞核提取物，使NF-κB蛋白結合到dsDNA上，洗滌除去未結合組分，先后加入NF-κB特異性抗體和HRP標記的二抗。加入酶底物后，通過酶促反應，讀取OD450值來定量樣本中NF-κB的活性。
圖2：NF-κB（p65）/ NF-κB（p50）轉錄因子分析試劑盒原理展示
●取代了傳統的凝膠遷移或電泳遷移率實驗（EMSA），基于ELISA反應原理可實現大量樣本的快速高通量檢測
●在DNA與蛋白質相互作用的水平檢測NF-κB活性，能夠檢測出細胞內真正處于活化狀態的NF-κB
●試劑盒中分別含有NF-κB（p65）/ NF-κB（p50）轉錄因子陽性對照
●NF-κB（p65）轉錄因子分析試劑盒可檢測人、小鼠及大鼠的NF-κB（p65），不與NF-κB（p50）發生交叉反應；NF-κB（p50）轉錄因子分析試劑盒可檢測人NF-κB（p50），不與NF-κB（p65）發生交叉反應
圖3：NF-κB（p50）/ NF-κB（p65）轉錄因子分析試劑盒結果展示
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