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準確檢測血清血漿樣本中microRNA的利器與應用

瀏覽次數:3814 發布日期:2012-12-4  來源:康成生物
大量研究表明,血液循環中的microRNA表達變化指征著疾病的發生和發展階段。同時,血液樣品在臨床易于獲取,且穩定不易降解,因此對于microRNA標記物篩選具有廣闊研究前景。

 
血清/血漿樣本用于microRNA研究的挑戰
• 血清血漿中不包含細胞,且microRNA含量低
• microRNA高度同源,例如hsa-let-7家族各成員
• 紅細胞破裂發生溶血后,會釋放抑制RT和PCR反應的物質
• 常規內參(如U6等)在血清血漿中含量不穩定,不適合作為內參對照基因

 
確檢測血清/血漿樣本microRNA的利器
丹麥Exiqon 公司miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR芯片,將芯片的高通量優勢與PCR的準確靈敏特點完整結合,實現對血清血漿等各種臨床樣本中的microRNA準確特異檢測:
• 基于LNA™專利技術;獨特的Universal RT反應
• 康成microRNA研究技術服務超過8年,客戶SCI文章60余篇,平均影響因子5.5分
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Human Serum/plasma panel (168 microRNA)
專為精確檢測血清血漿中microRNA設計,可直接用于microRNA
標記物篩選
• 重復性好:血漿樣本,兩次獨立實驗,相關系數R2達到0.96(圖一)
• 特異性強:區分單堿基差異microRNA;區分成熟microRNA和前體
• 靈敏度高:準確檢測血清血漿中microRNA,檢測限低至5個拷貝

最低僅需20μL的血清/血漿樣本,即可實現168microRNA準確特異檢測
• 獨特的Universal RT反應:一次逆轉錄制備的cDNA可作為所有microRNA PCR反應的模板
• RNA需求量少,特別適合血清/血漿檢測,最低于僅需20μL血清/血漿樣本(圖二)
• 統一逆轉錄,簡化實驗步驟,消除技術誤差,提高準確性
• 所含168個microRNA,基于大量文獻數據和Exiqon長期積累的豐厚研究成果

嚴格的質控系統,保障實驗結果可靠性
• 溶血判定:實驗前用Nanodrop檢驗樣本溶血情況,避免抑制PCR的物質
• 評估RT反應效率:RT反應設置Spike-in
• 監測PCR反應過程:PCR芯片內設陽性對照
• 擴增結果判定:采用SYBR green的PCR方法,可根據溶解曲線判斷擴增特異性
• 內參設置:選擇血清血漿中穩定高表達的microRNA(miR-423-5P等)為內參,校正數據



嚴格的質控系統,保障實驗結果可靠性
• 溶血判定:實驗前用Nanodrop檢驗樣本溶血情況,避免抑制PCR的物質
• 評估RT反應效率:RT反應設置Spike-in
• 監測PCR反應過程:PCR芯片內設陽性對照
• 擴增結果判定:采用SYBR green的PCR方法,可根據溶解曲線判斷擴增特異性
• 內參設置:選擇血清血漿中穩定高表達的microRNA(miR-423-5P等)為內參,校正數據

Exiqon已在數千例癌癥、免疫病等病人的血清/血漿中進行了microRNA篩查和驗證




 
發布者:上海康成生物工程有限公司
聯系電話:800-820-5058,400-886-5058,021-64452021
E-mail:market@kangchen.com.cn

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