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使用超高效合相色譜系統測定雌二醇(Estradiol)色譜純度

瀏覽次數:1799 發布日期:2012-6-14  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
目的
采用沃特世ACQUITY UPC2™系統對雌二醇進行雜質分析,能獲得和美國藥典(USP)方法相當或者更好的結果。
 
背景
目前,美國藥典(USP)檢測雌二醇(estradiol)色譜純度的方法使用4.6 x 250 mm的硅膠柱和含有2,2,4-三甲基戊烷、正丁基氯、甲醇45:4:1的流動相,流速2 mL/min。由于許多實驗室都想限制脂肪烴和氯化物溶劑的使用,所以必須對替代性的色譜方法,如超臨界流體色譜(SFC)進行評估。沃特世ACQUITY UPC2系統被用于開發測定雌二醇色譜純度的方法。Ultra Performance Convergence Chromatography™(UPC2™)得到的結果直接和由目前的美國藥典檢測雌二醇雜質的方法對比。兩種方法檢測的結果相似,與美國藥典使用的正相HPLC方法相比,UPC2方法檢測雌二醇雜質的靈敏度更高。此外,使用UPC2時,樣品的運行時間大大縮短,每次分析的總成本也顯著降低(基于溶劑用量和廢液處理成本計算)。
 
使用UPC2方法測定雌二醇的色譜純度,其速度是目前正相HPLC方法的3倍,而單次分析的成本降低100多倍。
 
解決方案
使用現行美國藥典方法制備和分析雌二醇,如圖1所示。HPLC分析的結果同ACQUITY UPC2系統分析的結果(使用相同的樣品制備方法)進行對比,如圖2所示。

UPC2方法的條件如下:

色譜柱: ACQUITY UPC2 BEH,2.1 x 150 mm,1.7 微米
流動相: A=CO2 B=1:1甲醇/異丙醇
背壓: 130 bar/1880 psi
柱溫: 45 °C
檢測: UV /PDA,280 nm
 

兩種測試方法得到的結果對比見表1。正相HPLC方法和UPC2均檢出至少5種含量小于0.1%(按面積計算)雜質。兩種方法在0.01%范圍內峰的信噪比約為3:1,UPC2結果得到的值稍高。UPC2方法測得的最大雜質(以面積計約0.05%)的信噪比為16:1,正相HPLC方法測得的為9:1。這些實驗結果清晰地表明,ACQUITY UPC2系統可成功地用于分析雌二醇中的微量雜質。UPC2方法的運行時間明顯短于正相HPLC方法所用的時間(20min對比60min),從而提高了實驗室的生產率。對每次運行的成本分析表明,正相HPLC的溶劑成本5.89美元,而使用UPC2,每次運行的成本僅為0.05美元。正相HPLC方法所產生需要處理的混合氯化物廢液為108Ml2,2,4-三甲基戊烷、9.6mL正丁基氯和2.4mL甲醇。UPC2方法產生的需處理廢液為甲醇和異丙醇各0.60mL。分離中使用的CO2通過實驗室排氣管排出。使用UPC2方法,廢液處理成本降低了150倍之多。2,2,4-三甲基戊烷、9.6mL正丁基氯和2.4mL甲醇。UPC2方法產生的需處理廢液為甲醇和異丙醇各0.60mL。分離中使用的CO2通過實驗室排氣管排出。使用UPC2方法,廢液處理成本降低了150倍之多。

關于沃特世公司 (www.waters.com)

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發布者:沃特世科技(上海)有限公司
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