原代懸浮細(xì)胞吉姆薩染色法

涂片法：

1. 用含有5%—10%血清的等滲液將培養(yǎng)的細(xì)胞調(diào)制成密度為106個(gè)/ml的細(xì)胞懸液；
2. 將1滴細(xì)胞懸液滴于一張載玻片的一端，用另一塊干凈的載玻片，按照血液涂片法將細(xì)胞鋪展于載玻片上；
3. 載玻片在空氣中干燥后，再用甲醇固定；
4. 對(duì)涂有細(xì)胞的載玻片進(jìn)行染色；
5. 注意，為避免細(xì)胞皺縮應(yīng)盡快使涂有細(xì)胞的載玻片干燥，可搖動(dòng)載玻片或用吹風(fēng)機(jī)的冷風(fēng)迅速吹干；
6. 用甲醇固定，吉姆薩染色；

離心法：

1. 需使用離心涂片機(jī)將細(xì)胞懸液的細(xì)胞直接離心沉淀在載玻片上，使細(xì)胞的離心沉淀和涂片同時(shí)進(jìn)行；
2. 制備細(xì)胞懸液，細(xì)胞懸液中用含有少量蛋白質(zhì)，并將細(xì)胞濃度調(diào)至106個(gè)/ml；
3. 將濾紙片孔對(duì)準(zhǔn)出孔，然后插入機(jī)頭凹槽內(nèi)，用彈簧片頂緊，使濾紙片夾于標(biāo)本室的出孔與載玻片之間；
4. 離心標(biāo)本必須對(duì)稱(chēng)放置，保持平衡。然后吸取細(xì)胞懸液0.1—0.2ml迅速滴入標(biāo)本室入口，以1000r/min離心5min；
5. 離心完畢后自動(dòng)關(guān)機(jī)。取出載玻片在空氣中干燥后；
6. 用甲醇固定，吉姆薩染色；

真空過(guò)濾法：

1. 用含有10%血清的培養(yǎng)液將培養(yǎng)物調(diào)制成濃度為106個(gè)/ml的細(xì)胞懸液；
2. 取5—10ml細(xì)胞懸液，用直徑為25mm、孔徑為0.5μm的Nucleopore多孔；
3. 當(dāng)過(guò)濾懸液還剩余2ml左右時(shí)，輕輕加入110ml平衡鹽溶液繼續(xù)過(guò)濾，到
剩余2ml時(shí)，再加入10ml平衡鹽溶液，繼續(xù)過(guò)濾。如此再重復(fù)一次。此步驟中平衡鹽溶液有漂洗細(xì)胞的作用，既能保證細(xì)胞充分、均勻地過(guò)濾，又為隨后的甲醇固定作好準(zhǔn)；
4. 然后加10ml甲醇到平衡鹽溶液中，一直重復(fù)到過(guò)濾出的液體是純甲醇為止；
5. 空氣中干燥，待甲醇完全揮發(fā)后，進(jìn)行吉姆薩染色；

染液制備：

1. 稱(chēng)取0.5g吉姆薩粉和22ml甘油；
2. 取少量甘油與吉姆薩粉在研缽內(nèi)充分混合，研磨至無(wú)顆粒；
3. 將剩余的甘油倒入研缽，于56℃保溫2h；
4. 加入33ml純甲醇混勻，即為吉姆薩母液，將其保存于棕色試劑瓶?jī)?nèi)；
5. 取9份pH6.80—7.38的Sorensen緩沖液和1份吉姆薩母液混合即得染色液；
7. 按2ml/cm2的比例滴加吉姆薩染液，覆蓋細(xì)胞層，染色2min；
8. 移除染液，用自來(lái)水沖洗掉粉紅色背景后，再用去離子水沖洗細(xì)胞；
9. 用顯微鏡觀察單層潮濕細(xì)胞。若細(xì)胞已干，可重新使細(xì)胞潮濕后再觀察；

結(jié)果：

細(xì)胞核被染成紫紅色或紫藍(lán)色，而細(xì)胞質(zhì)則被染成淺紅色；

注意事項(xiàng)：

1. 染液宜現(xiàn)用現(xiàn)配，舊染液染色效果不佳。染液保存時(shí)間不宜超過(guò)48h；
2. 吉姆薩對(duì)pH極敏感，因此，緩沖液pH要準(zhǔn)確，否則染色效果不佳。如用染色缸染色時(shí)，隨染色時(shí)間的延長(zhǎng)，在染液表面常形成一層氧化膜（發(fā)亮）易附著在玻片上形成污穢，且不易除掉。因此在用染色缸染色，尤其用的不是現(xiàn)配者時(shí)，染色前應(yīng)先用小片濾紙刮除液面的氧化層再進(jìn)行染色。染色完畢，應(yīng)把標(biāo)本浸入水中漂洗染液；