蛋白質(zhì)含量的比色測定，是在分光光度計(jì)上完成的。1983年Noble用液體閃爍計(jì)數(shù)器(液閃儀)測定蛋白含量。l988年強(qiáng)美玉做了分光光度計(jì)測定濃度范圍內(nèi)的研究。我們用Lowry和Bradford蛋白含量測定法，對液閃儀和分光光度計(jì)測定蛋白濃度范圍，準(zhǔn)確度，重復(fù)性和穩(wěn)定性進(jìn)行了比較研究。并用液閃儀測定了102份人精漿蛋白和31份人血清蛋白樣品。

 

1．1儀器FJ-2107型液閃儀(西安二六二廠)
260型可見紫外分光光度計(jì)(日本島津)。

1．2密封放射源在直徑0．3cm，長3cm的玻管內(nèi)加入H-雌二醇和甲苯閃爍液，燒封管口。平均放射計(jì)數(shù)為60016±120／6秒(n=15)。

1．3蛋白測量裝置將3ml顯色后的蛋白測定液置于測量套瓶中，放射源微管豎插于被測液中，測量套瓶放人閃爍瓶內(nèi)。

1．4液閃儀測定蛋白含量的原理放射源產(chǎn)生的光子，被有色的蛋白測定液淬滅，淬滅程度與蛋白濃度成比例。制備放射計(jì)數(shù)對蛋白濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可進(jìn)行蛋白定量測定。

 

2．1標(biāo)準(zhǔn)曲線Lowry(藍(lán)色)和Brdaford(棕色)測定液，低濃度時(shí)，液閎儀和分光光度計(jì)測定標(biāo)準(zhǔn)曲線均為直線。隨著蛋白濃度的增加，標(biāo)準(zhǔn)曲線彎曲，改用放射計(jì)數(shù)對蛋白濃度的對數(shù)作圖，標(biāo)準(zhǔn)曲線呈直線。放射計(jì)數(shù)與蛋白濃度，藍(lán)色測定液成正比，棕色測定液成反比。

 

2．2液閃儀與分光光度計(jì)測定蛋白濃度范圍比較。液閃儀比分光光度計(jì)測定蛋白濃度范圍寬12倍(藍(lán)色)和60倍(棕色)。見表1。

 

2．3液閃儀與分光光度計(jì)測定準(zhǔn)確度比較標(biāo)準(zhǔn)蛋白液顯色后用液閃儀和分光光度計(jì)測1o次，其均值與標(biāo)準(zhǔn)蛋白濃度比較。見表2。

 

2．4液閃儀與分光光度計(jì)測定重復(fù)性比較低和高濃度蛋白液顯色后用液閃儀和分光光度計(jì)測定，以批內(nèi)和批間變異系數(shù)(CV)比較。見表3。

 

2．5液閑儀與分光光度計(jì)測定穩(wěn)定性比較標(biāo)準(zhǔn)蛋白液顯色后于不同時(shí)間內(nèi)用液閃儀和分光光度計(jì)測定放射計(jì)數(shù)和吸光度。低濃度，8小時(shí)內(nèi)無顯著性差異(>0．05)；高濃度24小時(shí)內(nèi)無顯著性差異(P>0．05)。

 

2．6液閃儀與分光光度計(jì)測人精漿蛋白含量比較102份人精漿蛋白(I—owry)~31份人血清蛋清(Bradford法)顯色，液閃儀和分光光度計(jì)測定的蛋白含量值相關(guān)良好(r=0.974)，配對t檢驗(yàn)無顯著性差異(P>O．05)，見表5。

 

我們的結(jié)果顯示，液閃儀測定蛋白的濃度范圍比分光光度計(jì)寬l2～60倍，測定的重復(fù)性、穩(wěn)定性和準(zhǔn)確度可與分光光度計(jì)媲美。我們改進(jìn)Noble法：①改測定裝置使測定液由16ml減到3ml；③改用能量低、價(jià)格低，效果好的。H放射源；③對高濃度曲線進(jìn)行了對數(shù)轉(zhuǎn)換，實(shí)現(xiàn)了高濃度蛋白樣品的準(zhǔn)確測定。我們利用現(xiàn)代液閃儀先進(jìn)的樣品和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，使測定簡單、準(zhǔn)確、自動(dòng)化，同時(shí)叉拓寬了液閃儀的用途。