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核酸染料的作用機制與應用場景

瀏覽次數:780 發布日期:2025-3-26  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
核酸染料是一種能夠與DNA或RNA特異性結合并產生熒光信號的化學試劑,廣泛應用于分子生物學實驗中,用于核酸的檢測、定量及可視化分析。

一、作用機制
  1. 結合方式
    核酸染料通過電荷作用​(染料帶正電,核酸帶負電)、氫鍵作用​(與堿基結合)及疏水作用​(與疏水性堿基結合)與核酸結合。
  2. 熒光信號增強
    游離狀態下染料熒光微弱,結合核酸后熒光強度顯著增強(如SYBR Gold結合后增強超1000倍),從而實現高靈敏度檢測。
 
二、主要種類與特性
  1. 溴化乙錠(EB
    • 特性:嵌入DNA雙鏈堿基間,紫外激發下發出橘紅色熒光,靈敏度高(檢測限10ng DNA)。
    • 風險:強致癌性,需嚴格防護。
  2. SYBR系列染料
    • SYBR Green I:結合雙鏈DNA,熒光信號與DNA量正相關,用于qPCR定量。
    • SYBR Safe:低毒性,藍光激發即可觀察,避免紫外損傷。
    • SYBR Gold:靈敏度是EB的100倍,適用于低濃度核酸檢測。
  3. GelRed/GelGreen系染料
    • 特性:替代EB,無需脫色,紫外或可見光成像均可,靈敏度與EB相當。
  4. Goldview系染料
    • 特性:雙鏈DNA顯綠色,單鏈顯紅色,但熒光易淬滅,不適合膠回收。
  5. EvaGreen
    • 特性:低PCR抑制性,適用于qPCR、熔解曲線分析,穩定性高(95℃加熱48小時無分解)。
  6. LC Green PLUS
    • 特性:用于高分辨率熔解曲線分析,特別適合高GC含量DNA。
 
三、評價標準
  1. 安全性
    優先選擇低毒或無毒染料(如SYBR Safe、GelRed),通過Ames測試等評估。
  2. 靈敏度
    SYBR Gold、EvaGreen等靈敏度顯著優于EB。
  3. 穩定性
    EvaGreen、LC Green PLUS等在極端條件(高溫、酸堿)下穩定性優異。
  4. 實驗影響
    染料分子量越大(如SYBR Safe),對電泳遷移率影響越小。

四、應用場景
  • 電泳檢測:瓊脂糖凝膠中DNA/RNA可視化(如EB、達遠辰光RedView、GelRed)。
  • PCR分析:qPCR定量(SYBR Green I)、熔解曲線分析(EvaGreen)。
  • 細胞染色:熒光原位雜交(FISH)中核酸定位。
 
總結
核酸染料通過結合機制與熒光特性成為分子實驗的核心工具,隨著安全性與靈敏度的提升(如SYBR Safe、EvaGreen),其應用正從基礎研究向臨床診斷(如病原體檢測)擴展。選擇時需綜合毒性、靈敏度及實驗需求。
 
發布者:深圳達遠辰光科技有限公司
聯系電話:0755-86727654
E-mail:marketing@longlightech.com

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