簡介
       人血清白蛋白(HSA)是血漿中最重要的蛋白質(zhì)，其含量豐富。HSA的主要功能是攜帶脂肪酸和維持血液膠體滲透壓，是許多激素和藥物尤其是疏水藥物的重要載體。藥物與HSA結(jié)合增加了藥物的半衰期，降低了血液中游離藥物的濃度，對臨床護理具有極其重要的意義。在藥物發(fā)現(xiàn)早期，確定血漿蛋白結(jié)合是很重要的，因為它用于評估藥物的劑量需求和從體內(nèi)的清除。
 
材料和方法
       羧基甲基葡聚糖(CMD)包被的傳感器載玻片通過胺偶聯(lián)化學固定HSA(圖2)。固定在21°C下進行，使用5 mM MES (2-(N-morpholino)乙磺酸)pH 5.0作為運行緩沖液。表面用EDC/NHS活化，用5mM乙醇胺(pH 8.0)滅活。        采用SPR Navi 220A型儀器測定小分子藥物吲哚美辛、奎尼丁和萘普生(357.8、324.4和230.3 g/mol)與固定化HSA的相互作用。實驗采用pH為7.4的PBS(磷酸鹽緩沖鹽水)作為運行緩沖液，溫度為21℃。測量5個樣品濃度系列(0.1 ~ 50 μM)。奎尼丁是較弱的結(jié)合劑，因此測定了較高的濃度(10 ~ 500 μM)。樣品中含有3%的二甲基亞砜(DMSO)，以提高藥物的溶解度。用TraceDrawer分析了反應(yīng)的動力學和親和性。

結(jié)果和討論
       根據(jù)BioNavis固定方案，成功重復多次固定化HSA。傳感器表面固定HSA的平均量為2000 ng/cm²。通過MP-SPR測量，成功測定了三種小分子量藥物對HSA的穩(wěn)態(tài)親和力和結(jié)合動力學(表1)。吲哚美辛的親和力圖和動力學分析如圖3和圖4所示。分別測定兩次奎尼丁的結(jié)合度，得到的等結(jié)合值證實了結(jié)果的重復性。
 
結(jié)論
       MP-SPR儀器是測量小分子直接親和力的優(yōu)良工具。通過儀器的實時和無標簽測量，不僅可以有效地確定結(jié)合的穩(wěn)態(tài)，還可以有效地確定結(jié)合的動力學。這些類型的測量可用于臨床前藥物篩選和生化藥物開發(fā)。