一．細胞篩選的技術難點

在細胞（或組織）上篩選噬菌體展示基因文庫的主要挑戰(zhàn)在于細胞表面含有大量受體和蛋白質(zhì)。與篩選固定抗原不同，細胞表面的大量蛋白質(zhì)和某些蛋白質(zhì)組分的高豐度很容易干擾過表達抗原的細胞的篩選，甚至難以分離出目標抗體。

二．如何提高細胞篩選效率？

1. 降低背景信號的干擾：用相應的陰性細胞系（negative cell line）或組織進行背景扣除，這是一個負選擇的過程。影響本底消除效果的主要因素有：用于本底消除的細胞系選擇和細胞數(shù)量、細胞/噬菌體比例、結合和洗滌條件、噬菌體和細胞分離方法以及選擇輪數(shù)。在實際操作中，如何設置陽性和陰性選擇取決于所用抗體庫的類型和庫容量、細胞或組織類型、抗原過表達水平以及目標抗原的特性。

2. 提高選擇的靈敏度和特異性：主要通過優(yōu)化細胞篩選流程得以實現(xiàn)。除此之外，超大容量的抗體庫也是細胞篩選成功的關鍵。

3. 提高反應性：因為表達量和易變性的原因,細胞表面的腫瘤抗原和受體并不是制備抗體的理想免疫原,因此在原位篩選中必須提高選擇的效力以獲得相關抗體。

三．細胞分選的方法

對于在細胞培養(yǎng)板上生長的粘附細胞，噬菌體抗體文庫的結合、洗滌和洗脫類似于傳統(tǒng)的固相篩選。對于懸浮細胞的分選，可以將噬菌體與待篩選的細胞混合并孵育，并且可以通過低速或差速離心將與噬菌體結合的細胞分離成有機相以回收。對于標記的靶細胞，也可以將陰性選擇細胞添加到篩選中，并且可以使用FACS（熒光活化細胞分選）或MACS（磁性活化細胞分選（magnetic activated cell sorting））方法來分選標記的靶細胞。

四．細胞篩選的主要應用

在對腫瘤抗原和受體等膜蛋白的篩選中，保持天然構象至關重要，固相篩選難以勝任，完整的細胞篩選可以避免構象改變因其的問題。除了完整的細胞外，細胞膜制備物以及腫瘤組織切片上的抗原的靶材料。基于細胞的抗體篩選對腫瘤細胞進行篩選的研究日益廣泛。

五．細胞材料的選擇

在細胞篩選的靶點中，有些是經(jīng)過鑒定，基因序列已知的抗原，有些是尚未進行抗原鑒定的腫瘤細胞株，還有一類是對抗原信息知之甚少的腫瘤組織。對于少數(shù)序列和結構清楚的靶點，可以對純化的抗原或表達的重組蛋白進行篩選，但因為構象變化的原因，以這種方法獲得的抗體識別和結合天然狀態(tài)抗原的能力差別很大。通過細胞轉(zhuǎn)染的方法，可將抗原蛋白定位至細胞表面，以完整細胞或細胞裂解物為靶材料，可以篩選出特異性抗體。

六．抗體庫的選擇

在對細胞進行的抗體篩選中，可以使用由免疫動物B細胞中擴增獲得的抗體基因制備的免疫抗體庫，也可用無抗原傾向性的天然抗體庫、合成庫及半合成庫。免疫抗體庫的制備簡單，其編碼序列的抗原傾向性強，篩選的背景簡單，因此有望在庫容有限的情況下快速得到高親和力的抗體，不便之處在于，對于每種抗原都需要重新免疫和建庫，但有些抗原，由于免疫耐受或者毒性原因，很難奏效。此時可以選擇大容量非免疫庫或者合成庫完成篩選，特別是對于未知抗原和免疫原性很低的自身抗原，提高庫容以增加成功篩選的機會至關重要。天然庫和全合成大容量抗體庫序列構成無傾向性，容量大，且能克服體內(nèi)抗體重組過程中對自身抗體的抑制，因此適用性廣。半合成抗體庫中抗體分子的一條鏈（一般為輕鏈）序列固定，僅在重鏈中引入多樣性，因此所構建的抗體庫可能具有抗原傾向性。

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