THP-1細胞培養(yǎng)操作指南
< THP-1 細胞簡介 >
| 名稱 | THP-1 人單核細胞白血病 |
| 形態(tài) | 單核細胞 |
| 生長特性 | 懸浮生長 |
| 營養(yǎng)體系 | RPMI 1640【VivaCell: C3010】+ 10% 胎牛血清【VivaCell: C04002】+ 0.05mM 疏基乙醇 |
THP-1細胞系是1980年Tsuchiya等人建立的人單核細胞白血病細胞系。它來自一位急性單核細胞白血病患者的血液，有分化為多種巨噬細胞的能力，是各領域研究常用的細胞系之一。
THP-1是人外周血的單核細胞系，最初來源于急性單核細胞性白血病患者。屬于懸浮細胞，研究免疫和炎癥的理想工具。其表面抗原HLA型為：A2，A9，B5，DRw1，DRw2。
營養(yǎng)體系：細胞生長環(huán)境寧酸毋堿，開啟后的RPMI 1640培養(yǎng)基，建議一周內(nèi)使用完畢。
推薦傳代比例：1:3-1:6，每2-3天換液一次。
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃
01. 培養(yǎng)攻略 - 復蘇操作
/ 以T25培養(yǎng)瓶為例 /
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預熱水浴鍋至37℃；
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將細胞從液氮中取出后，放進一次性PE手套中，立即投入水浴鍋，迅速用力搖晃管子，使其在1分鐘內(nèi)融化；
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酒精擦拭凍存管，進入生物安全柜，把融化的細胞懸液緩慢滴加到預先加入5ml完全培養(yǎng)液的T25培養(yǎng)瓶中；
- 放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
- 復蘇密度建議1*10^6 cells/ml
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48小時不要動細胞，不要晃動培養(yǎng)皿，可以先豎直放置培養(yǎng)基
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通常需要3-5天恢復，期間不做離心操作
- 可先提高THP-1細胞量，再去考慮解決細胞聚團或碎片的問題
02. 培養(yǎng)攻略 - 傳代操作
半換液法傳代操作 / 以T25培養(yǎng)瓶為例 /
圖片來源 thp-1細胞半換液 - Bing images
- 營養(yǎng)液要給足。以T25培養(yǎng)瓶為例其營養(yǎng)液不要少于5ml
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不要頻繁觀察細胞，最多一天一次即可
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不要頻繁離心換液，當發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基有些變黃（橘紅色）再補液1-2ml即可
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當細胞密度達到約2*10^6 cells/ml左右時（如果換液后培養(yǎng)基第二天便發(fā)黃，鏡下檢測無污染時）進行傳代
- 一定不要每天離心！最多一周離心一次
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預先配制好凍存液；【推薦使用VivaCell: C3522-0100，即用型凍存液】
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細胞約200g 3min離心后，去上清，用配好的凍存液重懸細胞；
- 轉移入凍存管，放進程序凍存盒。凍存盒放進-80度冰箱過夜，再放液氮長期保存。
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THP-1細胞易受凍存影響，建議適量增加凍存細胞量(不低于1*10^6/支)
- 要在液氮中保存
04.培養(yǎng)攻略 - 培養(yǎng)問題
< 細胞聚團問題 >
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少量正常，建議不再處理，繼續(xù)培養(yǎng)細胞量。
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若較多，建議排查培養(yǎng)箱、營養(yǎng)體系的酸堿性、以及是否有新?lián)Q血清。
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此細胞很容易分化成為巨噬細胞。
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少量正常，建議傳代時候丟棄。
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較多，建議選用非TC處理過的培養(yǎng)瓶、排查培養(yǎng)箱、營養(yǎng)體系的酸堿性、以及是否有新?lián)Q血清。
