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白管在熒光定量PCR實驗耗材選擇中的優勢和應用

瀏覽次數:2338 發布日期:2023-4-3  來源:本站 僅供參考,謝絕轉載,否則責任自負
明白之間——說說熒光定量PCR實驗耗材的選擇
 
小朗課堂
 
前兩天,小朗在與某實驗室研究員交流時了解到這么一個情況,他們在qPCR實驗時使用透明管,得到的實驗結果熒光信號值比較低,曲線被壓得很低,坐標軸也不能自適應曲線,顯示如下圖。

 
而正常情況如下圖,縱坐標的范圍是可以隨著曲線最大熒光信號值而變化的,并可獲得一條漂亮的S曲線。

 
明白了這個情況后,小朗為其推薦了白管,更換成白管后,問題就迎刃而解了。
 
那么,問題來了,
為何做qPCR實驗時一定要用白管呢?
熒光信號值與哪些因素有關呢?
我們一起來學習一下吧~
 
白管PK透明管
 
PCR管/板常見的有白色和透明兩種。在傳統PCR實驗中,兩者在使用效果上沒有太大差異,相比較透明管更為方便,因為實驗者更容易看清楚試劑加上與否。但在熒光定量PCR實驗中,白管的優勢就凸顯出來了。
 
優勢一:白管管壁支持一致的信號反射,提高qPCR結果的一致性。
qPCR實驗的核心數據是Ct值,而熒光信號是Ct值計算的數據來源,所以管內的熒光能否完好地傳遞至頂部的檢測器是至關重要的。
 
如下圖是三種不同透明度的管子,因為透明管四周均是透明的,對于底部試劑激發出來的熒光會散向四面八方,管內的熒光信號只有少量能到達管頂部,最終只有少量信號進入檢測器,且管間熒光信號不一致。

 
圖1 白管和透明管內部熒光信號路線圖
 
然而,如圖1所示,與其他管材相比,白管管壁不透明,幾乎沒有信號丟失,且隔絕了樣品臺污染的熒光信號干擾,減少了相同樣本孔間差異。
 
優勢二:白管支持最大限度的信號傳輸,改進對低拷貝數樣本的檢測,提高靈敏度。

圖2 白管和透明管檢測信號對比圖
 
從圖2中可以看出,同樣試劑量的情況下,到達檢測器的信號強度,使用白管明顯高于透明管。因此相比于透明管,使用白管可明顯提高檢測器檢測到的信號強度,提高qPCR數據的靈敏度。
 
優勢三:支持更小體系擴增,節約實驗成本。
正因為白管有著高靈敏度的特性,使用白管可以采用小體積反應,從而可減少實驗試劑量,大大節省成本~

圖3 白管擴增結果展示圖
 
國際一線品牌也同樣證實白管更適合實時熒光定量實驗的結論。

 
如上圖,qPCR使用透明和白色耗材的結果比較:
(A)與透明孔相比,白色孔Ct值更低(靈敏度更高)。
(B)白色孔在技術重復中也表現出更高的一致性。
在設置實時PCR或qPCR的反應時,與透明耗材相比,我們更推薦使用白色耗材,以實現靈敏和準確的熒光檢測。
——賽默飛生命科學
  
Jena

 
Sarstedt
 
Eppendorf
 
那么熒光定量PCR儀需要采用
什么技術才能滿足使用白管呢?
我們來看一下
國際主流品牌的定量PCR儀產品,
一探究竟吧~
 
首先我們來看一下賽默飛的高端系列Q5和Q7,他們用的是CCD頂部檢測的技術方案,再來看一下羅氏的旗艦產品LG480,我們可以看到,他們用的也是CCD頂部檢測技術。

 
朗基是國內第一家全部采用頂部CCD檢測技術的定量PCR儀廠家。
 
朗基奧金系列熒光定量PCR系統
 
頂部CCD檢測技術光學部件固定,穩定性好,故障率低,對熒光信號的接收和處理能力強,是定量PCR儀檢測技術的大勢所趨。
 
頂部CCD檢測技術
 
此外,同樣是白管,我們實驗證明白管的質量高低也會影響熒光信號值的大小。如下圖:

 
結果表明,相較于其他品牌白色管和透明管的擴增曲線,朗基標配的白色管的熒光信號值更強,曲線重合度更好。
 
綜上所述,
在進行qPCR實驗時,
使用白管和頂部檢測技術的qPCR儀,
可獲得更佳實驗結果。
 
朗基奧金系列熒光定量PCR儀
采用頂部CCD檢測技術,
配套的管材都是白管,
也可單獨采購白管,
歡迎選購朗基產品,
聯系我們哦~




發布者:杭州朗基科學儀器有限公司
聯系電話:0571- 8886 2165,8886 2284,
E-mail:info@longgene.com

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