Western blot免疫蛋白印跡法的發展、應用及傳統濕轉跟半干轉優缺點
WB最初是由Towbin等人于1979年提出，并稱之為免疫印跡法(immunoblotting)[1]
后于1982年由Burnette將免疫蛋白印跡法稱為Western Blotting[2]。
使用含8M尿素的18%聚丙酰胺凝膠分離大腸桿菌核糖體總蛋白后分別進行考凝膠馬斯亮染色（圖A）與膜上蛋白印跡酰胺黑染色（圖B）
Western Blot應用[3]：
1、檢測細胞中目的蛋白的表達：通過WB 技術直接檢測干細胞分化、細胞自噬、細胞凋亡、周期蛋白、DNA損傷修復、分子診斷標志物等關鍵通路蛋白，可評估細胞或機體所處的生物學狀態。
2、對基因的功能缺失研究：通過敲減或過表達目的基因后，用WB 技術檢測相關通路蛋白的表達變化，以確定目的基因激活或抑制目的蛋白的表達調控關系，探究信號通路。
3、研究目的蛋白所處的細胞定位：蛋白的分選投遞與發揮功能是基因調控的結果，因此改變了某些基因的活性，或化學修飾可能會影響其效應蛋白的轉運，改變細胞核質中的分布，引發不同的生物學效應。
4、藥物處理、代謝類的研究：
5、蛋白相互作用類研究：通過WB可檢測Co-IP、RIP、CHIRP等實驗的IP產物，研究目標蛋白-蛋白，RNA-蛋白之間的相互作用。
Western Blot法實際上是凝膠電泳技術、固定化技術及分子親和技術三者融為一體的綜合性技術，其核心在于把WB轉膜。WB轉膜是將通過電泳分離后的蛋白轉移到固相載體上，如PVDF膜。我們常用電泳印跡法進行蛋白轉移，電泳轉移的方式分為濕轉和半干轉。兩者雖然名稱不一，但是原理是一樣的，使用三明治結構（即濾紙-膜-凝膠-濾紙的結構），在電場正負極作用下將帶負電的蛋白從凝膠轉移至載體膜上。蛋白呈現負電的原因是因為蛋白等電電PI一般為6，在溶液中PH>PI時蛋白呈負電[4]。
傳統濕轉跟半干轉，各有優缺點。100KD以下蛋白適用半干轉，且半干轉速率快。因為半干轉的電流不會側漏，全都在濾紙之間，所以轉的效率比較高，速度快，缺點是有效離子濃度衰減快，可能幾分鐘就耗盡了，這個時候大蛋白還沒來得及轉上，再加上產熱大，可能燒糊。相反的，濕轉則是有效電流少，不全在濾紙之間，會從緩沖液間側漏，所以轉的效率低下，速度就慢了，但是有效離子濃度高，能夠長時間進行轉膜，因此適用于100KD以上的大分子蛋白的轉膜。那么能不能既能有效減少電流側漏的同時，又不斷補充有效離子的方法呢？有，中科通儀就做到了。
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1.Towbin H, Staehelin T, Gordon J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications[J]. Proc Natl Acad Sci U S A, 1979, 76(9):4350-4.
2.Burnette W N . "Western Blotting": Electrophoretic transfer of proteins from sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gels to unmodified nitrocellulose and radiographic detection with antibody and radioiodinated protein A[J]. Analytical Biochemistry, 1981, 112(2):195-203.
3.https://www.sohu.com/a/470319795_121124540
4.Fawcett J S . Isoelectric fractionation of proteins on polyacrylamide gels[J]. FEBS letters, 1968, 1(1):81-82.
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