核酸脂質納米粒后處理注意事項：粒徑測定與除溶劑

瀏覽次數：1368　發布日期：2021-9-8　來源：锘海

在我們使用微流控或其他方法合成核酸脂質納米粒后，成品溶液常常因有機溶劑的存在而極不穩定。以常見的微流控水相、有機相合成比3:1為例，有機相溶劑常使用無水乙醇，在混合后仍然有高達25%的含量。高濃度的乙醇將逐漸破壞溶液中的納米粒子，使其粒徑逐漸增大。有的甚至能在短短數小時內由50 nm增長到200 nm，嚴重影響實驗結果和方案評估，所以合理、及時的后處理尤為重要。通常而言，后處理等同于除溶劑，但一般也會對溶液中的納米粒子進行粒徑測定。

粒徑測定通常使用動態光散射粒度儀，需要注意的是，不同品牌的粒度儀對于同一個樣品的檢測結果會有些許差別。另外，在檢測過程中，需要注意待測液體的濃度和溫度對結果造成的影響：一般而言，濃度過高的液體因散射光被大量粒子阻擋，所測出的粒徑偏差較大；而溫度決定了粒子布朗運動強度，溶液溫度沒有平衡前也會影響粒徑的檢測結果。

除溶劑則通常采用超濾或透析。超濾為主動式，速度快；透析為被動式，速度慢。有些科研工作者可能會擔心超濾的方式過于猛烈，導致納米粒子的破壞。對于這一點其實沒有必要過于擔心，一方面在超濾的過程中，并不會完全將溶劑去除——通常在剩1 – 2 mL時就停止離心；另一方面超濾相對于透析更快，雖有極少量的納米粒子破壞，卻避免了有機溶劑長期留存帶來的影響，兩害取其輕，超濾仍舊是除溶劑的有效辦法。

超濾管

測粒徑和除溶劑的具體步驟如下：
1. 完成納米粒子的合成后（假定成品1 mL），立刻用去鈣去鎂的D-PBS進行40倍稀釋，體積為40 mL。稀釋后取0.5 – 1 mL左右進行粒徑測定，剩余39 – 39.5 mL執行剩余步驟以除溶劑。

2. 將剩余溶液倒入超濾管中，室溫（20℃）下以2000×g的速度離心5 – 30 min，離心時間依超濾管孔徑大小而有所區別，第一次嘗試時可以密切關注超濾管中的液體，以剩余1 – 2 mL為停止信號。

3. 取出超濾管，將下方液體倒出，在超濾管上方繼續添加剩余溶液（如果步驟2沒有完全倒入超濾管中的話），并用移液槍吸取管中液體沖洗濾膜數次，按步驟2的參數再次超濾。

4. 重復步驟2 – 3，直至溶液全部濃縮至1 mL左右。用移液槍吸取管中液體沖洗濾膜數次后將液體全部吸出轉移并在生物安全柜中過0.2 μm濾膜除菌（如不進行生物實驗則無需除菌）后，即為最終品。

得到最終品后，就可根據使用者的實際需求稀釋成相應濃度，并進行動物或細胞實驗。

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