在免疫組織化學(xué)染色中，冰凍切片是被研究人員使用最多的一種切片方法。原因是這種切片方式能夠較完好地保存各種抗原的免疫活性及酶類，特別是對有機(jī)溶劑或熱的溫度耐受能力較差的細(xì)胞膜表面抗原和水解酶保存；而且對組織存儲(chǔ)的形態(tài)沒有限制，新鮮組織和已固定的組織都可使用冰凍切片。
 

 

冰晶是如何形成的呢？
冰凍切片中按照冰晶形成在細(xì)胞內(nèi)外的位置不同，表現(xiàn)形式有細(xì)胞外冰晶、細(xì)胞質(zhì)內(nèi)冰晶、細(xì)胞核內(nèi)冰晶。在冰凍切片中，細(xì)胞外冰晶是冰凍切片中最多見的，各種組織均可以出現(xiàn)。

冰晶形成的原因是組織冷凍速度太慢。冰凍開始時(shí)，冰晶成核率較慢，以后逐漸增加，其臨界溫度為-33℃，從-30℃降至-43℃之間，成核率急劇增加，然后再減慢。冰晶的大小與其生長速率成正比，而與成核率（形成速率）成反比，即冰晶形成的數(shù)量愈多則愈小，對組織結(jié)構(gòu)影響愈嚴(yán)重。因此，應(yīng)盡量降低冰晶的數(shù)量。要減少冰晶形成，組織冷凍的方式和操作流程至關(guān)重要。

如何解決冰晶問題，提高切片質(zhì)量？
可采取速凍措施減少冰晶的形成，使組織溫度驟降，縮短溫度下降（-33℃~ -43℃）所需時(shí)間，從而減少冰晶的形成。目前已知的方法有：

1. 使用液氮；這種可快速冷凍組織，有效減少冰晶形成。但因技術(shù)成本和管理成本高，使用過程安全性不高，存在生物安全問題等因素，沒有被廣泛運(yùn)用。
2. 采用半導(dǎo)體制冷技術(shù)；瑞沃德Minux®智能恒溫冷凍切片機(jī)使用該技術(shù)，一鍵啟動(dòng)快冷模式，設(shè)備自動(dòng)開啟固定吸熱塊，可在1-3分鐘內(nèi)把溫度降至-55℃~-60℃。

快速冷凍組織操作流程

*注意：

• OCT包埋劑影響組織冷凍速度，使用須適量。
• 冷凍過組織的固定式吸熱塊，必須放在速凍臺上再次降溫后使用。
• 可將組織置于20%、30%蔗糖溶液梯度脫水，利用高滲吸收組織中水分，減少組織含水量。

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