從時(shí)間成本，金錢(qián)成本，以至于感情投入角度來(lái)評(píng)判，論實(shí)驗(yàn)室常規(guī)的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)?zāi)囊粋�(gè)具備最低的投入產(chǎn)出比，相信大家都會(huì)選擇Western Blot實(shí)驗(yàn) 。各位正在科研道路上奮戰(zhàn)或者已經(jīng)成功打怪升級(jí)的同學(xué)們細(xì)數(shù)一下那些年你做的Western Blot，再數(shù)一下最后發(fā)表文章用到的Western Blot結(jié)果圖，相信比例低于1%的不在少數(shù)。
 

那么緣何Western Blot具有如此低下的投入產(chǎn)出比呢？仔細(xì)品品，Western Blot實(shí)驗(yàn)并非是一個(gè)非常復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)，然而影響因素卻極其多，其中有些是可控的，有些是需要經(jīng)驗(yàn)判斷的，而有些只是需要留意實(shí)驗(yàn)操作細(xì)節(jié)，就能夠做好的。而整個(gè)流程中，大家往往會(huì)非常重視那些不可感知的實(shí)驗(yàn)條件，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化的流程固定參數(shù)，以減少實(shí)驗(yàn)組和樣品之間的偏差，比如樣品的獲取過(guò)程，通常會(huì)固定裂解液的種類(lèi)，用量，時(shí)間等等因素；比如電泳過(guò)程，通常會(huì)固定電壓或電流，并通過(guò)預(yù)染maker的指示固定電泳的總時(shí)間，也可以通過(guò)購(gòu)買(mǎi)預(yù)制膠減少電泳膠批次之間的誤差；比如轉(zhuǎn)膜和曝光，也可固定操作時(shí)間盡量減少誤差。但是這其中，最簡(jiǎn)單的操作部分，卻往往被忽視了，那就是封閉，洗滌和抗體孵育部分。

諸如上樣，電泳，轉(zhuǎn)膜，曝光流程，這些步驟的實(shí)驗(yàn)相對(duì)比較獨(dú)立，不受其他人實(shí)驗(yàn)的干擾，且通常是一次性的步驟，大家往往會(huì)遵守嚴(yán)格的操作流程。而封閉，洗滌和抗體孵育部分，由于是多次反復(fù)的操作，且經(jīng)常和其他實(shí)驗(yàn)室人員共享?yè)u床平臺(tái)，因此往往很難固定一個(gè)統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。比如，實(shí)驗(yàn)室很多的簡(jiǎn)易搖床并無(wú)控制振蕩速度和頻率的按鈕和參數(shù)；比如在封閉或孵育的時(shí)候遇到其他人員需要洗滌而對(duì)搖床的速度進(jìn)行了調(diào)整，反之亦然；比如洗滌過(guò)程中沒(méi)有固定洗滌液的體積而是隨意倒入一定的量，甚至有時(shí)候倒入洗滌液的時(shí)候直接沖擊在膜上；比如多次洗滌的時(shí)間間隔不統(tǒng)一，有時(shí)候因需要配合其他實(shí)驗(yàn)的安排而延長(zhǎng)/縮短洗滌時(shí)間，或者增加/減少洗滌次數(shù)等等。由于Western Blot實(shí)驗(yàn)的封閉、洗滌和抗體孵育的效果很大程度上取決于時(shí)間，分子擴(kuò)散，液體交換效率等因素，因此上述各種條件的不統(tǒng)一，綜合下來(lái)會(huì)影響封閉的效果，抗體結(jié)合的效率和特異性，背景的干凈程度。雖然每次實(shí)驗(yàn)都會(huì)以?xún)?nèi)參來(lái)衡量不同樣品之間的差異，但是多次實(shí)驗(yàn)之間卻因?yàn)橐陨细鞣N因素的不統(tǒng)一，導(dǎo)致較大的實(shí)驗(yàn)偏差。因此將以上多次反復(fù)的簡(jiǎn)單操作進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，可極大提高Western Blot的穩(wěn)定性，減少重復(fù)次數(shù)。

除此之外，封閉，洗滌和抗體孵育部分也是整個(gè)Western Blot中最耗時(shí)但卻沒(méi)有技術(shù)含量的部分，通常這幾個(gè)步驟的總時(shí)間會(huì)占用Western Blot的1/2以上，并且在這期間，需要研究人員時(shí)刻待命進(jìn)行抗體和洗滌液的更換，嚴(yán)重影響了進(jìn)行其他實(shí)驗(yàn)的安排。并且基于以下2個(gè)原因，很多人選擇一抗過(guò)夜，將Western Blot分成2天之內(nèi)完成。其中一個(gè)原因是擔(dān)心抗體的特異性不行，背景高，因此選擇低溫孵育過(guò)夜以提高特異結(jié)合和降低非特異背景；第二個(gè)原因是第一天進(jìn)行整個(gè)Western Blot的實(shí)驗(yàn)流程會(huì)導(dǎo)致做到晚上很晚的時(shí)間。通常一抗孵育過(guò)夜之后，第二天早上進(jìn)行洗滌，二抗孵育，洗滌，曝光，往往要到中午或者午飯后才能出結(jié)果，然后再?zèng)Q定當(dāng)日是否需要繼續(xù)調(diào)整樣品重新進(jìn)行新一輪的Western Blot實(shí)驗(yàn)，其中留給數(shù)據(jù)分析和思考如何優(yōu)化下一步流程的時(shí)間比較少，因此容易陷入未經(jīng)詳細(xì)思考，便倉(cāng)促進(jìn)入下一個(gè)實(shí)驗(yàn)流程的惡性循環(huán)中。

那么如何解決以上關(guān)于封閉，抗體孵育和洗滌這類(lèi)簡(jiǎn)單的重復(fù)勞動(dòng)帶來(lái)的對(duì)整個(gè)Western Blot流程和結(jié)果的影響呢？唯一的解決方案就是對(duì)這幾個(gè)步驟進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化和自動(dòng)化，以減少人工的干預(yù)，以及有效利用凌晨的時(shí)間。目前市場(chǎng)上推出不少可解決這些問(wèn)題的小型自動(dòng)化設(shè)備，比如美國(guó)Cellagen Technology公司的Flexiwash FW400

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FlexiWash FW400自動(dòng)化免疫雜交系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)了對(duì)繁瑣耗時(shí)的Western blots膜的孵育和洗滌過(guò)程的自動(dòng)化和標(biāo)準(zhǔn)化過(guò)程。在蛋白被轉(zhuǎn)移到雜交膜上之后，可將雜交膜裝載到FlexiWash FW400工作站中進(jìn)行自動(dòng)封閉、孵育和洗滌循環(huán)。實(shí)驗(yàn)人員僅需要準(zhǔn)備相應(yīng)體積的試劑，啟動(dòng)免疫雜交流程，即可讓FlexiWash FW400完成剩下所有的工作，直至曝光前。獨(dú)有的液體處理設(shè)計(jì)，使得FlexiWash FW400支持4批樣品的同時(shí)孵育/洗滌，每個(gè)樣品可獨(dú)立進(jìn)行編程，互不干擾。
 
節(jié)約時(shí)間和成本

• Load-and-go一鍵調(diào)用模板，無(wú)人值守的快速孵育和洗滌過(guò)程。
• 將人工操作時(shí)間降低到幾分鐘，再也不用時(shí)時(shí)刻刻守著Western blots。
• 自動(dòng)回收珍貴試劑（比如一抗、二抗、封閉液等）進(jìn)行重復(fù)利用。
• 帶有溫控模塊，可一抗低溫過(guò)夜。

高度靈活

• 單個(gè)程序可設(shè)置多達(dá)7步孵育/洗滌流程。
• 每個(gè)步驟可編輯當(dāng)前所需用的試劑來(lái)源、體積、孵育/洗滌時(shí)間以及循環(huán)次數(shù)。
• 友好的用戶界面：大視野LCD觸摸屏用于編輯程序和顯示狀態(tài)。
• 三種不同規(guī)格尺寸的抗體孵育盒，兼容各種類(lèi)型、大小的膠和膜。

FlexiWash FW400操作界面
更好的Western Blot 結(jié)果

• 可重復(fù)性好：減少了人工操作流程中孵育/洗滌時(shí)間和加入液體體積的隨意性。
• 方便優(yōu)化條件：可平行比較4種不同的雜交條件，如：不同的封閉試劑，抗體稀釋度，孵育時(shí)間，洗滌次數(shù)等。

通過(guò)以上的自動(dòng)化操作，不僅可以實(shí)現(xiàn)對(duì)封閉，抗體孵育和洗滌的自動(dòng)化和標(biāo)準(zhǔn)化，極大釋放科學(xué)家的時(shí)間，可以專(zhuān)注于數(shù)據(jù)分析，文獻(xiàn)閱讀和更高級(jí)的實(shí)驗(yàn)中，并且有效利用晚上和凌晨的時(shí)間進(jìn)行操作，第二天早上到達(dá)實(shí)驗(yàn)室后可直接進(jìn)行曝光和數(shù)據(jù)分析，可以從容地進(jìn)行第二輪實(shí)驗(yàn)的優(yōu)化設(shè)計(jì)和實(shí)施。


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