第20-30步

徠卡101

組織脫水、透明、浸蠟、包埋

從患者到病理學家，準備樣本進行診斷需要細心、經驗以及合理的流程。

徠卡特地為大家整理了取材、組織脫水、透明、浸蠟、包埋以及染色等（常規、特殊、IHC以及FISH）101步操作流程，幫助大家更有效、更簡單地獲得實驗方案，避免錯誤的發生。

 

步驟二十

使用合適的脫水程序

🙆正確：按照組織的類型和大小選擇合適的脫水程序；

🙅 錯誤：使用不適合的脫水程序，比如：小組織長時間脫水，大組織或者脂肪組織脫水時間過短。

A. 內窺鏡活檢 (H&E)脫水時間過長， 組織變得很脆，導致大量的

切片裂痕，而且切片技術不好會加劇這個現象；

B. 鏡下可見從大的脂肪樣本中選取的皮下組織脫水不足，纖維脂

肪組織浸蠟不充分，核界變得支離破碎。

 

步驟二十一

提供額外的固定

🙆正確：優質的脫水效果以及好的組織形態基于充分的固定，所以在脫水前中加入固定步驟；

🙅 錯誤：在沒有充分固定的情況下，直接放入乙醇中產生“帶狀固定”  （福爾馬林固定的是樣本表面，而乙醇則是固定更深層次的區域）  。

A. 骨髓穿刺“帶狀固定”圖：左上部的紅細胞完整，而右下角細胞

則部分溶血；

B. 三色染色的肝組織“帶狀固定”圖：外層和里層的染色結果是不一樣的。

 

步驟二十二

確保試劑質量

🙆正確：脫水試劑更換嚴格按照標準化的操作指南進行（最理想的就是按照 Leica 最新的組織脫水機 Peloris Il 上的試劑管理系統要求操作）；

🙅 錯誤：不按照指南進行操作，忽略脫水試劑更換，這意味著使用無效的、受污染的或者濃度過低的試劑（比如忽略Peloris試劑管理系統“超過臨界值”的警告），由此導致差的脫水質量。

從大皮膚樣本中取出的切片，由于不充分的組織脫水導致大量膠原蛋白流失。這個案例很可能就是使用了嚴重污染的超過“臨界值”的試劑。

 

步驟二十三

使用高質量的石蠟

🙆正確：高質量的石蠟用于浸蠟和包埋，確保高質量的蠟塊，易于切片；

🙅 錯誤：便宜的、低質量的石蠟產品進行浸蠟和包埋，導致切片困難。

蠟塊冷卻后進行緩慢的切片可以切成蠟帶。圖中雖然在低溫下進行切片，切片仍有輕微的皺縮，主要是由于低質量的石蠟使切片不能很好的成片

 

步驟二十四

避免使用有毒試劑

🙆正確：可能使用無二甲本程序（如 Leica Peloris II 高端脫水機），在確保更安全的工作環境的同時也能獲得最好的脫水效果;；

🙅 錯誤：沒有考慮二甲本對身體的影響，不使用二甲本替代物。

二甲本替代物在保證操作人員的安全同時確保脫水質量。

 

步驟二十五

正確放置樣本

🙆正確：樣本必需按照正確的方向放置。高質量的取材方式，可以確保樣本表面平整。技術員必需經過良好的培訓才能進行包埋，并且隨時可根據樣本情況進行樣本描述；

🙅 錯誤：如果樣本方向錯誤，就要重新進行包埋，這有可能導致組織的丟失。樣本包埋得不好的話，可能會需要修片多一點，以獲得更全的切面。

這個內窺鏡活檢組織放置的方向不對，僅顯示了黏膜的表面。

 

步驟二十六

選擇適合的磨具

🙆正確：針對每一個樣本選擇大小合適的模具；

🙅 錯誤：一種的模具用于所有的樣本。有可能樣本已經碰到模具的邊緣了。

A. 對這個樣本來說，這個模具太小了，樣本已經到蠟塊邊緣了，切片可能會很難；

B. 不同大小的模具適合不同大小的樣本。

 

步驟二十七

輕輕地拿取樣本

🙆正確：包埋過程中輕輕地夾取樣本；

🙅 錯誤：為了使樣本平貼在模具中，樣本被強力擠壓，這會導致有些組織斷裂。

脾臟的 H&E 染色切片：包埋過程中為了樣本平貼在模具中，強力擠壓，導致組織中間斷裂。

 

步驟二十八

避免過熱

🙆正確：夾取組織之前，熱鉗加熱到蠟剛剛融化的溫度；

🙅 錯誤：熱鉗加熱溫度超過蠟的熔點，這可能會引起局部過熱或者靠近熱鉗的地方變形。

肝臟的 H&E 染色切片：局部破壞（組織基本沒法辨識），這是由于包埋過程中組織局部過熱引起。

 

步驟二十九

定期檢查溫度

🙆正確：定期檢查熱盤和蠟缸的溫度；

🙅 錯誤：從來不檢查熱盤的溫度，導致樣本會因局部過熱而被破壞。

淋巴結由于熱盤過熱而被破壞，圖中可以看到細胞萎縮、核固縮以及細胞開裂。細胞開裂也可能的原因是展片時溫度過熱或者熱盤干燥時沒有充分排水。 

 

步驟三十

避免在包埋模塊中加蠟過多

🙆正確：模具加蠟適量，不能過多；

🙅 錯誤：模具加蠟過多，需要刮掉包埋盒邊緣的以及底部的石蠟,再進行切片。蠟過多的蠟塊可能在切片機上不穩定，由此導致切片過程中對組織的破壞。

包埋過程中包埋模具加蠟過多的蠟塊

 

接下來我們將會為大家帶來切片、展片、烤片等操作流程小貼士，感興趣的話可以關注我們徠卡101系列，后續我們將會為您奉上更詳盡的內容。