一級菌種培養(yǎng)基的制備實驗！
一級菌種培養(yǎng)基的制備實驗！
一、實驗?zāi)康?/strong>
1．了解一級菌種培養(yǎng)基配制的原則；
2．掌握一級菌種培養(yǎng)基配制的工藝流程；
3．學(xué)會一級菌種培養(yǎng)基配制的具體方法步驟；
4．學(xué)會棉塞的制作方法和手提式高壓蒸汽鍋的使用方法。
二、實驗設(shè)備、工具和材料
手提式高壓鍋、1000～1500W電爐、感量1／10g的粗天平、1000mL量杯、玻璃漏斗、漏斗架各一個，8～10cm長乳膠管一根，止流夾一個，20mm×200mm試管150支左右，鐵絲筒兩個，小刀和剪子一把，普通棉花250g，牛皮紙、馬鈴薯、瓊脂和葡萄糖或蔗糖適量。
三、實驗步驟
(1)取適量馬鈴薯，削去皮，挖去芽眼。稱取200g，切成薄片或小塊，用清水淘洗之后，放入鍋內(nèi)，加水1200mL，用文火煮沸20～30min，用四層紗布過濾，取濾液1000mL，如不足加水補足1000mL。
(2)稱取瓊脂20g，洗凈剪碎，加入馬鈴薯煮出液中，用文火加熱，邊煮邊攪拌，直至全部瓊脂融化，再用四層紗布過濾，并用熱水補足1000mL，加入預(yù)先溶解的葡萄糖水，攪拌之后煮2min后停火。
(3)分裝試管。根據(jù)要求，用1%鹽酸或1%氫氧化鈉溶液調(diào)整酸堿度后，將培養(yǎng)基趁熱分裝在試管中。
先在玻璃漏斗嘴上套一段長8～10cm的乳膠管，卡上止流夾，將培養(yǎng)基倒入漏斗中（其余培養(yǎng)基要置電爐上保溫）。左手握住3～5支試管，讓乳膠管伸入試管中部，右手拇指和食指按下止流夾，逐一注入培養(yǎng)基，裝入量以試管長度的1/5～1／4為宜。分裝時不要讓培養(yǎng)基沾在試管口上，若已沾上，要用干凈紗布擦干凈。
(4)塞棉塞。培養(yǎng)基分裝試管后，要塞上棉塞。
制作棉塞的方法很多，這里介紹一種常用的方法。取適量棉片，在桌上鋪成長12～15cm，寬12cm左右的薄棉墊，先將棉墊下部1／3向上折疊，再將上部1／3向下折疊，然后將長棉墊逆時針方向轉(zhuǎn)90°，讓光滑的一邊向左用右手持棉墊并用拇指按住，左手拇指和食指向外旋卷，并將參差不齊的棉纖維纏住呈一圓柱形。用右手按順時針方向?qū)⒚奕M管口內(nèi)，塞入部分為棉塞長度的2/3。
(5)捆扎試管。塞好棉塞之后，應(yīng)將試管捆成束，并用牛皮紙將棉塞部分包扎好，裝進高壓鍋內(nèi)滅菌。
(6)滅菌。用手提式高壓蒸汽滅菌鍋滅菌。其步驟如下。
①加水。先向鍋內(nèi)加水，略超過支架。
②裝鍋。將包扎好的試管直立放在內(nèi)筒中，不要裝得過緊、過滿。
③關(guān)嚴鍋蓋。先將軟管對好內(nèi)筒插孔，蓋嚴鍋蓋，對角旋緊旋鈕。
④加熱。插上電爐插頭或推上電閘加熱。
⑤排放冷空氣。開始加熱時將放氣閥打開，待看到有大量蒸汽排出后關(guān)上放氣閥。
⑥升壓保壓。排放冷空氣之后，繼續(xù)加熱，當壓力表指針達到0.11MPa時，開始計時，維持30min。
⑦降壓排氣。維持30min之后，拔下電源插頭或拉開電閘，使其自然冷卻，或從電爐上把鍋提下來，待壓力表指針降到零時，打開放氣閥，排放蒸汽。
⑧出鍋。排完氣后，松開旋鈕，將鍋蓋揭開一小縫，待培養(yǎng)基溫度降至60℃左右時，取出試管。
⑨擺斜面。試管從鍋內(nèi)取出后，要將試管一支一支地散放在桌面上的小木條上，使之冷卻成斜面。斜面長度為試管長度的2/3。
(7)空白實驗。將滅菌后的斜面試管，各組隨機抽取幾支，放在28～32℃溫箱中空白培養(yǎng)48～72h，如無任何雜菌生長，說明滅菌徹底，才可使用。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司擁有Biolog微生物鑒定系統(tǒng)，超低溫冰箱，生物安全柜等儀器設(shè)備可進行對微生物分離、鑒定等常規(guī)的分子實驗研究。對我國生命科學(xué)研究、生物技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)業(yè)發(fā)展的需求進行積極的面對社會乃至國外收集保藏提供微生物菌種資源。在保證生物安全和保護知識產(chǎn)權(quán)的前提下，為工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、衛(wèi)生健康、環(huán)境保護、科研教育提供微生物物種資源、基因資源、信息資源和專業(yè)技術(shù)服務(wù)。
http://www.biobw.com/
一、實驗?zāi)康?/strong>
1．了解一級菌種培養(yǎng)基配制的原則；
2．掌握一級菌種培養(yǎng)基配制的工藝流程；
3．學(xué)會一級菌種培養(yǎng)基配制的具體方法步驟；
4．學(xué)會棉塞的制作方法和手提式高壓蒸汽鍋的使用方法。
二、實驗設(shè)備、工具和材料
手提式高壓鍋、1000～1500W電爐、感量1／10g的粗天平、1000mL量杯、玻璃漏斗、漏斗架各一個，8～10cm長乳膠管一根，止流夾一個，20mm×200mm試管150支左右，鐵絲筒兩個，小刀和剪子一把，普通棉花250g，牛皮紙、馬鈴薯、瓊脂和葡萄糖或蔗糖適量。
三、實驗步驟
(1)取適量馬鈴薯，削去皮，挖去芽眼。稱取200g，切成薄片或小塊，用清水淘洗之后，放入鍋內(nèi)，加水1200mL，用文火煮沸20～30min，用四層紗布過濾，取濾液1000mL，如不足加水補足1000mL。
(2)稱取瓊脂20g，洗凈剪碎，加入馬鈴薯煮出液中，用文火加熱，邊煮邊攪拌，直至全部瓊脂融化，再用四層紗布過濾，并用熱水補足1000mL，加入預(yù)先溶解的葡萄糖水，攪拌之后煮2min后停火。
(3)分裝試管。根據(jù)要求，用1%鹽酸或1%氫氧化鈉溶液調(diào)整酸堿度后，將培養(yǎng)基趁熱分裝在試管中。
先在玻璃漏斗嘴上套一段長8～10cm的乳膠管，卡上止流夾，將培養(yǎng)基倒入漏斗中（其余培養(yǎng)基要置電爐上保溫）。左手握住3～5支試管，讓乳膠管伸入試管中部，右手拇指和食指按下止流夾，逐一注入培養(yǎng)基，裝入量以試管長度的1/5～1／4為宜。分裝時不要讓培養(yǎng)基沾在試管口上，若已沾上，要用干凈紗布擦干凈。
(4)塞棉塞。培養(yǎng)基分裝試管后，要塞上棉塞。
制作棉塞的方法很多，這里介紹一種常用的方法。取適量棉片，在桌上鋪成長12～15cm，寬12cm左右的薄棉墊，先將棉墊下部1／3向上折疊，再將上部1／3向下折疊，然后將長棉墊逆時針方向轉(zhuǎn)90°，讓光滑的一邊向左用右手持棉墊并用拇指按住，左手拇指和食指向外旋卷，并將參差不齊的棉纖維纏住呈一圓柱形。用右手按順時針方向?qū)⒚奕M管口內(nèi)，塞入部分為棉塞長度的2/3。
(5)捆扎試管。塞好棉塞之后，應(yīng)將試管捆成束，并用牛皮紙將棉塞部分包扎好，裝進高壓鍋內(nèi)滅菌。
(6)滅菌。用手提式高壓蒸汽滅菌鍋滅菌。其步驟如下。
①加水。先向鍋內(nèi)加水，略超過支架。
②裝鍋。將包扎好的試管直立放在內(nèi)筒中，不要裝得過緊、過滿。
③關(guān)嚴鍋蓋。先將軟管對好內(nèi)筒插孔，蓋嚴鍋蓋，對角旋緊旋鈕。
④加熱。插上電爐插頭或推上電閘加熱。
⑤排放冷空氣。開始加熱時將放氣閥打開，待看到有大量蒸汽排出后關(guān)上放氣閥。
⑥升壓保壓。排放冷空氣之后，繼續(xù)加熱，當壓力表指針達到0.11MPa時，開始計時，維持30min。
⑦降壓排氣。維持30min之后，拔下電源插頭或拉開電閘，使其自然冷卻，或從電爐上把鍋提下來，待壓力表指針降到零時，打開放氣閥，排放蒸汽。
⑧出鍋。排完氣后，松開旋鈕，將鍋蓋揭開一小縫，待培養(yǎng)基溫度降至60℃左右時，取出試管。
⑨擺斜面。試管從鍋內(nèi)取出后，要將試管一支一支地散放在桌面上的小木條上，使之冷卻成斜面。斜面長度為試管長度的2/3。
(7)空白實驗。將滅菌后的斜面試管，各組隨機抽取幾支，放在28～32℃溫箱中空白培養(yǎng)48～72h，如無任何雜菌生長，說明滅菌徹底，才可使用。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司擁有Biolog微生物鑒定系統(tǒng)，超低溫冰箱，生物安全柜等儀器設(shè)備可進行對微生物分離、鑒定等常規(guī)的分子實驗研究。對我國生命科學(xué)研究、生物技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)業(yè)發(fā)展的需求進行積極的面對社會乃至國外收集保藏提供微生物菌種資源。在保證生物安全和保護知識產(chǎn)權(quán)的前提下，為工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、衛(wèi)生健康、環(huán)境保護、科研教育提供微生物物種資源、基因資源、信息資源和專業(yè)技術(shù)服務(wù)。
http://www.biobw.com/
Copyright(C) 1998-2025 生物器材網(wǎng) 電話：021-64166852;13621656896 E-mail：info@bio-equip.com