UP.SIGHT2.0實現>99.99%單克隆保障與全流程數字化整合
在生物制藥領域，細胞株開發（Cell Line Development, CLD）正經歷效率與合規性的雙重革命。隨著單克隆抗體和基因治療等產品的研發周期縮短至18至24個月，傳統技術面臨三大核心瓶頸：多設備切換導致的工作流割裂顯著延長研發周期，分選與成像環節的技術局限使得單克隆性難以保證，而人工操作模式更無法滿足日益嚴格的監管追溯要求。
為應對這些挑戰，德國CYTENA公司研發的影像式單細胞打印與成像系統UP.SIGHT 2.0，通過雙重成像驗證體系與全流程數字化整合，重構了CLD技術的范式。
本研究基于16,949孔級實驗數據，系統驗證了UP.SIGHT 2.0的單細胞分選效率（SCDE）和單克隆概率（p(clonal)），并通過培養基與孔板的優化提升了克隆恢復率。數據顯示，SCDE超過97%、p(clonal)超過99.99%，克隆回收率高達80%，結果表明：UP.SIGHT 2.0覆蓋了單細胞分選的全流程，確保單克隆性和克隆追蹤，從而加速CLD工作流程。
實驗結果
1. 單細胞分選效率（SCDE）驗證
研究者通過三項獨立實驗（共分配45塊384孔板，分析超17,000孔）評估了UP.SIGHT 2.0的單細胞分配效率（SCDE）。每項實驗均使用三臺UP.SIGHT 2.0以排除儀器特異性因素的影響。
結果顯示，97.82%的孔含有單細胞，1.89%為空孔，只有0.29%包含多個細胞（多為雙細胞）。多細胞孔的主要原因是細胞重疊（28/48）或與噴嘴壁接近未被識別（11/48），僅有5例無法通過噴嘴圖像檢測�？湛字饕捎诩毎捶峙洌�38/330）或僅分配碎片（4/330）。UP.SIGHT 2.0的SCDE超過97%，且多細胞孔比例很低（<0.5%），但后者可能影響單克隆性，因此研究者進一步分析了單克隆來源的概率。
2. 單克隆概率（p(clonal)）驗證
UP.SIGHT 2.0系統通過單細胞分配和雙重圖像驗證（噴嘴成像與3D全孔成像）來驗證單克隆概率。
實驗數據顯示，在優化參數下，噴嘴成像誤差率為0.088%（5/16,949孔），3D成像誤差率為0.139%（11/16,949），兩者同時出錯的概率僅為0.0001225%，單克隆概率達99.9998775%。即使在次優參數下（人為提高雙細胞率至16.6%），計算誤差率仍低于0.000446%，單克隆概率保持99.9955%。即使在觀測誤差率較高（分別為0.000059%（1例）和0.04%（2例））的情況下，經過高估因子校正后實際概率仍可達99.9993%。結果表明，UP.SIGHT 2.0通過嚴格的圖像驗證可將單克隆來源概率穩定控制在>99.99%水平。
3. 克隆恢復優化：培養基與孔板的影響
研究表明，克隆恢復率顯著受培養基和孔板選擇的影響。實驗中使用CHOK1-Her2細胞評估不同培養條件，發現CHOlean培養基的克隆恢復率優于CDCHO，且穩定性更高。補充20%的條件培養基可將恢復率大幅提升至60%-80%。此外，不同廠商的384孔板和96孔板因表面特性、設計及成像兼容性等差異，導致恢復率波動較大。通過系統優化培養基配方和篩選合適的孔板，可顯著提高單細胞克隆的成功率，為治療性蛋白生產和基因治療提供可靠支持。
實驗結論
本研究系統評估了影像式單細胞打印與成像系統UP.SIGHT 2.0在細胞株開發（CLD）中的關鍵性能指標與創新價值，揭示了其在單克隆保障、流程整合及成本效益方面的突破性進展：
1. 優秀的單克隆保障能力
噴嘴高速成像系統：500fps超高速攝像精準捕捉每個液滴，實現97.8%的單細胞分選效率（SCDE），多細胞孔率僅0.29%（較FACS降低20倍）。
板底3D全孔成像：專利Z軸成像技術穿透培養基實現細胞3D定位，消除15%的傳統成像盲區。
雙重驗證機制：兩系統獨立運作，單克隆保證概率>99.99%（置信區間99%）。
2. 全流程一體化革新：從“多儀器串聯”到“單平臺閉環”
集成單細胞分選（定位精度±3μm）、實時克隆驗證與動態生長監測功能，將傳統多設備串聯流程簡化為單平臺操作，減少60%人工干預。
數字化溯源系統自動生成符合21 CFR Part 11的電子記錄，包括每孔200+張時間戳圖像、統計學置信區間計算及CTD格式申報資料。完整數據鏈支持生物制品質量追溯，直接滿足基因治療、CAR-T等前沿領域需求。
3. 標準化與指導意義
研究成果不僅驗證了UP.SIGHT 2.0系統的可靠性，更為用戶提供了從儀器驗證到工藝優化的標準化指南，對提升細胞株開發效率、質量控制及生物制品申報具有重要實踐價值。
為應對這些挑戰，德國CYTENA公司研發的影像式單細胞打印與成像系統UP.SIGHT 2.0，通過雙重成像驗證體系與全流程數字化整合，重構了CLD技術的范式。
本研究基于16,949孔級實驗數據，系統驗證了UP.SIGHT 2.0的單細胞分選效率（SCDE）和單克隆概率（p(clonal)），并通過培養基與孔板的優化提升了克隆恢復率。數據顯示，SCDE超過97%、p(clonal)超過99.99%，克隆回收率高達80%，結果表明：UP.SIGHT 2.0覆蓋了單細胞分選的全流程，確保單克隆性和克隆追蹤，從而加速CLD工作流程。
實驗結果
1. 單細胞分選效率（SCDE）驗證
研究者通過三項獨立實驗（共分配45塊384孔板，分析超17,000孔）評估了UP.SIGHT 2.0的單細胞分配效率（SCDE）。每項實驗均使用三臺UP.SIGHT 2.0以排除儀器特異性因素的影響。
結果顯示，97.82%的孔含有單細胞，1.89%為空孔，只有0.29%包含多個細胞（多為雙細胞）。多細胞孔的主要原因是細胞重疊（28/48）或與噴嘴壁接近未被識別（11/48），僅有5例無法通過噴嘴圖像檢測�？湛字饕捎诩毎捶峙洌�38/330）或僅分配碎片（4/330）。UP.SIGHT 2.0的SCDE超過97%，且多細胞孔比例很低（<0.5%），但后者可能影響單克隆性，因此研究者進一步分析了單克隆來源的概率。
2. 單克隆概率（p(clonal)）驗證
UP.SIGHT 2.0系統通過單細胞分配和雙重圖像驗證（噴嘴成像與3D全孔成像）來驗證單克隆概率。
實驗數據顯示，在優化參數下，噴嘴成像誤差率為0.088%（5/16,949孔），3D成像誤差率為0.139%（11/16,949），兩者同時出錯的概率僅為0.0001225%，單克隆概率達99.9998775%。即使在次優參數下（人為提高雙細胞率至16.6%），計算誤差率仍低于0.000446%，單克隆概率保持99.9955%。即使在觀測誤差率較高（分別為0.000059%（1例）和0.04%（2例））的情況下，經過高估因子校正后實際概率仍可達99.9993%。結果表明，UP.SIGHT 2.0通過嚴格的圖像驗證可將單克隆來源概率穩定控制在>99.99%水平。
3. 克隆恢復優化：培養基與孔板的影響
研究表明，克隆恢復率顯著受培養基和孔板選擇的影響。實驗中使用CHOK1-Her2細胞評估不同培養條件，發現CHOlean培養基的克隆恢復率優于CDCHO，且穩定性更高。補充20%的條件培養基可將恢復率大幅提升至60%-80%。此外，不同廠商的384孔板和96孔板因表面特性、設計及成像兼容性等差異，導致恢復率波動較大。通過系統優化培養基配方和篩選合適的孔板，可顯著提高單細胞克隆的成功率，為治療性蛋白生產和基因治療提供可靠支持。
實驗結論
本研究系統評估了影像式單細胞打印與成像系統UP.SIGHT 2.0在細胞株開發（CLD）中的關鍵性能指標與創新價值，揭示了其在單克隆保障、流程整合及成本效益方面的突破性進展：
1. 優秀的單克隆保障能力
噴嘴高速成像系統：500fps超高速攝像精準捕捉每個液滴，實現97.8%的單細胞分選效率（SCDE），多細胞孔率僅0.29%（較FACS降低20倍）。
板底3D全孔成像：專利Z軸成像技術穿透培養基實現細胞3D定位，消除15%的傳統成像盲區。
雙重驗證機制：兩系統獨立運作，單克隆保證概率>99.99%（置信區間99%）。
2. 全流程一體化革新：從“多儀器串聯”到“單平臺閉環”
集成單細胞分選（定位精度±3μm）、實時克隆驗證與動態生長監測功能，將傳統多設備串聯流程簡化為單平臺操作，減少60%人工干預。
數字化溯源系統自動生成符合21 CFR Part 11的電子記錄，包括每孔200+張時間戳圖像、統計學置信區間計算及CTD格式申報資料。完整數據鏈支持生物制品質量追溯，直接滿足基因治療、CAR-T等前沿領域需求。
3. 標準化與指導意義
研究成果不僅驗證了UP.SIGHT 2.0系統的可靠性，更為用戶提供了從儀器驗證到工藝優化的標準化指南，對提升細胞株開發效率、質量控制及生物制品申報具有重要實踐價值。
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