HL-1心肌細胞培養和復蘇的主意事項及其應用前景
細胞簡介
HL-1心肌細胞系是一只成年雌性近交系C57BLy 6J小鼠中切除的皮下腫瘤中建立，該小鼠為轉染了由心房利鈉因子啟動子和SV40區域組成的融合基因的轉基因小鼠。能夠持續分裂和自發收縮，同時保持已分化的心臟表型。HL-1細胞可以連續傳代且不會失去其分化的特異性心肌細胞表型，常用于研究正常心肌細胞在信號轉導、細胞代謝和轉錄調控方面的功能，以及體外模擬諸如缺氧、高血糖-高胰島素血癥、細胞凋亡和缺血-再灌注等病理條件。
解鎖心臟研究的鑰匙
HL-1細胞系成為了科學家們研究心臟生理、病理及藥物篩選的重要工具。然而，HL-1細胞的培養并非易事，今天，我們將為您揭開HL-1細胞培養的神秘面紗，并分享一些關鍵的注意事項，助您在心臟研究的道路上走得更穩、更遠。
一、HL-1細胞培養的培養細節介紹
1. 培養基準備
HL-1細胞的生長依賴于特制的培養基，通常由以下成分組成：
· Claycomb培養基：這是HL-1細胞的標準培養基，需添加10%胎牛血清（FBS）。 (Sigma貨號：51800C)
· 添加劑：包括去甲腎上腺素（0.1 mM）貨號： CSP209、L-谷氨酰胺（2 mM）貨號：CSP012。
· 推薦購買中喬新舟完全培養基： 貨號 ZM0920。
2. 細胞的培養注意事項
· 該細胞貼壁性差，培養過程中會有一些圓形細胞。推薦使用Corning的高吸附cellbinding細胞培養瓶（貨號：3289）進行細胞培養。或者使用明膠基質CSP132預包被培養瓶，37度孵育至少1小時后去除基質再進行細胞培養，或包被好放入4度備用。
· HL-1細胞培養生長至80% 即可傳代。細胞消化時間略長，約8-15分鐘細胞成纖維樣細胞收縮分離脫落即可用完全培養液終止消化即可。
· 細胞培養過程中，培養基2-3天不進行換液，培養基會變深，變黑的現象，是正常現象。
· 為確保培養基的新鮮，建議完全培養基避光保存，減少添加劑的降解。
· 嚴格無菌操作，避免細菌、真菌或支原體污染。定期檢測細胞是否被支原體污染，必要時使用支原體清除試劑處理。
3. 細胞信息
· 細胞特征：HL-1細胞應呈現典型的梭形或多邊形部分貼壁不牢固的圓形，排列緊密。
· 倍增時間：~35-50 小時，生長緩慢，(80%匯合度T25瓶傳2個T25培養瓶長滿約4-6天)
· 換液頻率：2~3次/周
4.細胞復蘇
· 從液氮中取出凍存的HL-1細胞，迅速放入37℃水浴中解凍。(或用干冰盒轉移到實驗室)
· 將細胞懸液轉移至含預溫培養基的離心管中，輕輕混勻。(15ML離心管3ml)
· 以1000 rpm離心5分鐘，棄上清，用新鮮培養基重懸細胞。（T25添加7ml）
· 將細胞接種于預先涂覆明膠的培養皿中，置于37℃、5% CO₂的培養箱中培養。
· 由于該細胞復蘇后貼比率差，且形態不好看，我司決定HL-1細胞以凍存管的方式出售。
· 以下圖片是我司客戶收到凍存管復蘇后第二天細胞圖。復蘇T25培養瓶后4-5天可進行傳代處理。期間可換液一次。(T25瓶7ml培養基)。
5. 細胞傳代
· 當細胞密度達到80%-90%時，即可進行傳代。
· 棄去舊培養基，用PBS輕輕洗滌細胞。
· 加入0.25%胰酶-EDTA溶液，37℃消化8-15分鐘。消化成流沙狀成單個細胞脫落。
· 加入完全培養基終止消化，輕輕吹打細胞至單細胞懸液。
· 按1:2或1:3的比例將細胞接種至新的明膠包被培養皿中。
6. 細胞凍存
· 選擇對數生長期的細胞，消化并收集細胞懸液。
· 以1000 rpm離心5分鐘，棄上清。
· 用凍存液（90% FBS + 10% DMSO）重懸細胞，分裝至凍存管中。
· 采用程序降溫法或無血清凍存液，最后轉移至液氮中長期保存。
二、HL-1細胞的應用前景
HL-1細胞因其獨特的心肌細胞特性，在心血管研究中具有廣泛的應用價值：
· 疾病模型構建：通過基因編輯或藥物處理，模擬心肌肥厚、心律失常等疾病狀態。
· 藥物篩選：用于評估藥物對心肌細胞的影響，加速新藥研發進程。
· 分子機制研究：揭示心臟發育、代謝及信號通路的分子機制。
HL-1細胞的培養雖然具有一定的挑戰性，但只要掌握正確的操作方法和注意事項，便能充分發揮其在心臟研究中的潛力。無論是探索心臟疾病的奧秘，還是開發新型治療藥物，HL-1細胞都將成為您科研路上的得力助手。讓我們一起用心呵護這些“跳動”的細胞，為心血管健康貢獻一份力量！
HL-1心肌細胞系是一只成年雌性近交系C57BLy 6J小鼠中切除的皮下腫瘤中建立，該小鼠為轉染了由心房利鈉因子啟動子和SV40區域組成的融合基因的轉基因小鼠。能夠持續分裂和自發收縮，同時保持已分化的心臟表型。HL-1細胞可以連續傳代且不會失去其分化的特異性心肌細胞表型，常用于研究正常心肌細胞在信號轉導、細胞代謝和轉錄調控方面的功能，以及體外模擬諸如缺氧、高血糖-高胰島素血癥、細胞凋亡和缺血-再灌注等病理條件。
（中喬新舟HL-1細胞培養圖 10X）
解鎖心臟研究的鑰匙
HL-1細胞系成為了科學家們研究心臟生理、病理及藥物篩選的重要工具。然而，HL-1細胞的培養并非易事，今天，我們將為您揭開HL-1細胞培養的神秘面紗，并分享一些關鍵的注意事項，助您在心臟研究的道路上走得更穩、更遠。
一、HL-1細胞培養的培養細節介紹
1. 培養基準備
HL-1細胞的生長依賴于特制的培養基，通常由以下成分組成：
· Claycomb培養基：這是HL-1細胞的標準培養基，需添加10%胎牛血清（FBS）。 (Sigma貨號：51800C)
· 添加劑：包括去甲腎上腺素（0.1 mM）貨號： CSP209、L-谷氨酰胺（2 mM）貨號：CSP012。
· 推薦購買中喬新舟完全培養基： 貨號 ZM0920。
2. 細胞的培養注意事項
· 該細胞貼壁性差，培養過程中會有一些圓形細胞。推薦使用Corning的高吸附cellbinding細胞培養瓶（貨號：3289）進行細胞培養。或者使用明膠基質CSP132預包被培養瓶，37度孵育至少1小時后去除基質再進行細胞培養，或包被好放入4度備用。
· HL-1細胞培養生長至80% 即可傳代。細胞消化時間略長，約8-15分鐘細胞成纖維樣細胞收縮分離脫落即可用完全培養液終止消化即可。
· 細胞培養過程中，培養基2-3天不進行換液，培養基會變深，變黑的現象，是正常現象。
· 為確保培養基的新鮮，建議完全培養基避光保存，減少添加劑的降解。
· 嚴格無菌操作，避免細菌、真菌或支原體污染。定期檢測細胞是否被支原體污染，必要時使用支原體清除試劑處理。
3. 細胞信息
· 細胞特征：HL-1細胞應呈現典型的梭形或多邊形部分貼壁不牢固的圓形，排列緊密。
· 倍增時間：~35-50 小時，生長緩慢，(80%匯合度T25瓶傳2個T25培養瓶長滿約4-6天)
· 換液頻率：2~3次/周
4.細胞復蘇
· 從液氮中取出凍存的HL-1細胞，迅速放入37℃水浴中解凍。(或用干冰盒轉移到實驗室)
· 將細胞懸液轉移至含預溫培養基的離心管中，輕輕混勻。(15ML離心管3ml)
· 以1000 rpm離心5分鐘，棄上清，用新鮮培養基重懸細胞。（T25添加7ml）
· 將細胞接種于預先涂覆明膠的培養皿中，置于37℃、5% CO₂的培養箱中培養。
· 由于該細胞復蘇后貼比率差，且形態不好看，我司決定HL-1細胞以凍存管的方式出售。
· 以下圖片是我司客戶收到凍存管復蘇后第二天細胞圖。復蘇T25培養瓶后4-5天可進行傳代處理。期間可換液一次。(T25瓶7ml培養基)。
（hl-1細胞復蘇第二天，圖片由手機拍攝，中喬客戶提供）
5. 細胞傳代
· 當細胞密度達到80%-90%時，即可進行傳代。
· 棄去舊培養基，用PBS輕輕洗滌細胞。
· 加入0.25%胰酶-EDTA溶液，37℃消化8-15分鐘。消化成流沙狀成單個細胞脫落。
· 加入完全培養基終止消化，輕輕吹打細胞至單細胞懸液。
· 按1:2或1:3的比例將細胞接種至新的明膠包被培養皿中。
6. 細胞凍存
· 選擇對數生長期的細胞，消化并收集細胞懸液。
· 以1000 rpm離心5分鐘，棄上清。
· 用凍存液（90% FBS + 10% DMSO）重懸細胞，分裝至凍存管中。
· 采用程序降溫法或無血清凍存液，最后轉移至液氮中長期保存。
二、HL-1細胞的應用前景
HL-1細胞因其獨特的心肌細胞特性，在心血管研究中具有廣泛的應用價值：
· 疾病模型構建：通過基因編輯或藥物處理，模擬心肌肥厚、心律失常等疾病狀態。
· 藥物篩選：用于評估藥物對心肌細胞的影響，加速新藥研發進程。
· 分子機制研究：揭示心臟發育、代謝及信號通路的分子機制。
HL-1細胞的培養雖然具有一定的挑戰性，但只要掌握正確的操作方法和注意事項，便能充分發揮其在心臟研究中的潛力。無論是探索心臟疾病的奧秘，還是開發新型治療藥物，HL-1細胞都將成為您科研路上的得力助手。讓我們一起用心呵護這些“跳動”的細胞，為心血管健康貢獻一份力量！
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