甘油三酯含量測定試劑盒實驗分光光度法測定操作詳解
測定原理：
用異丙醇提取甘油三酯（triglyceride, TG），脂蛋白酯酶水解TG生成甘油和脂肪酸（FFA），甘油與三磷酸腺苷在甘油激酶和磷酸甘油氧化酶催化下生成H2O2，過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基安替比林偶聯酚，生成有色化合物，在505 nm處有特征吸收峰。
注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
甘油三酯（triglyceride, TG）是長鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不僅是細胞膜的主要成分，也是重要呼吸底物。
TG的提取：
1、組織中TG的提取：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即TG待測液。2、細胞、細菌中TG的提取：先收集400-500萬細胞或細菌到離心管內，離心后棄上清，加1mL試劑一，超聲波破碎1min（強度20％，超聲2s，停1s），8000g，4℃離心10min，取上清，即TG待測液。
3、血清（漿）樣品：直接測定。
測定操作：
可見分光光度計預熱30min，調節波長到505 nm。
混勻，室溫下靜置20min，于505 nm波長處讀取吸光值，記為A空白和A測定，△A=A測定-A空白。空白管只需測一管。
計算公式：
標準曲線：y = 0.6522x - 0.0199； R2 = 0.9979；x：標準品濃度（mg/mL） y：吸光值差值ΔA。
1. 血清（漿）中甘油三酯含量計算：
TG含量（mg/mL）=（ΔA+0.0199）÷0.6522=1.533×（ΔA+0.0199）
2. 組織、細菌或細胞中甘油三酯含量計算：
(1)按樣本蛋白濃度計算
TG含量（mg/ mg prot）= (ΔA+0.0199)÷0.6522×V樣÷(Cpr×V樣）=1.533×（ΔA+0.0199）÷Cpr
(2)按樣本質量計算
TG含量（mg/ g 鮮重）=（ΔA+0.0199）÷0.6522×V樣÷(W×V樣÷V樣總）=1.533×（ΔA+0.0199）÷ W
V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入試劑一體積，1 mL；W：樣本質量，g；
Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL。
注意事項：
1. 試劑盒中有易揮發性物質，實驗過程中需佩戴手套和口罩，試劑瓶蓋打開后應該及時蓋緊。
2. 最低檢出限為100μg/mL。
用異丙醇提取甘油三酯（triglyceride, TG），脂蛋白酯酶水解TG生成甘油和脂肪酸（FFA），甘油與三磷酸腺苷在甘油激酶和磷酸甘油氧化酶催化下生成H2O2，過氧化物酶催化過氧化氫氧化4-氨基安替比林偶聯酚，生成有色化合物，在505 nm處有特征吸收峰。
注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
甘油三酯（triglyceride, TG）是長鏈脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不僅是細胞膜的主要成分，也是重要呼吸底物。
TG的提取：
1、組織中TG的提取：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿，8000g，4℃離心10min，取上清，即TG待測液。2、細胞、細菌中TG的提取：先收集400-500萬細胞或細菌到離心管內，離心后棄上清，加1mL試劑一，超聲波破碎1min（強度20％，超聲2s，停1s），8000g，4℃離心10min，取上清，即TG待測液。
3、血清（漿）樣品：直接測定。
測定操作：
可見分光光度計預熱30min，調節波長到505 nm。
| 試劑（μL） | 空白管 | 測定管 |
| 樣本 | 50 | |
| 試劑一 | 50 | |
| 試劑二 | 475 | 475 |
| 試劑三 | 475 | 475 |
計算公式：
標準曲線：y = 0.6522x - 0.0199； R2 = 0.9979；x：標準品濃度（mg/mL） y：吸光值差值ΔA。
1. 血清（漿）中甘油三酯含量計算：
TG含量（mg/mL）=（ΔA+0.0199）÷0.6522=1.533×（ΔA+0.0199）
2. 組織、細菌或細胞中甘油三酯含量計算：
(1)按樣本蛋白濃度計算
TG含量（mg/ mg prot）= (ΔA+0.0199)÷0.6522×V樣÷(Cpr×V樣）=1.533×（ΔA+0.0199）÷Cpr
(2)按樣本質量計算
TG含量（mg/ g 鮮重）=（ΔA+0.0199）÷0.6522×V樣÷(W×V樣÷V樣總）=1.533×（ΔA+0.0199）÷ W
V樣：加入樣本體積，0.01 mL；V樣總：加入試劑一體積，1 mL；W：樣本質量，g；
Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL。
注意事項：
1. 試劑盒中有易揮發性物質，實驗過程中需佩戴手套和口罩，試劑瓶蓋打開后應該及時蓋緊。
2. 最低檢出限為100μg/mL。
Copyright(C) 1998-2025 生物器材網 電話：021-64166852;13621656896 E-mail：info@bio-equip.com