液體活檢作為一種新興的癌癥診斷和監(jiān)測技術，主要樣本類型包括全血、血漿、胸腔積液、腹腔積液、尿液、腦脊液以及唾液等。該技術在腫瘤的早期篩查、早期診斷、治療監(jiān)測及預后評估等多個環(huán)節(jié)展現出巨大潛力，有望為腫瘤全周期的診斷和治療提供解決方案。

01 液體活檢現有的挑戰(zhàn)

Fig. 1 液體活檢示例

1.1 需要靈活多樣的檢測方法
液體活檢技術能夠提供一系列豐富的生物標志物，包括循環(huán)游離DNA（cfDNA）、循環(huán)游離RNA（cfRNA）以及甲基化DNA等，需要靈活多樣的檢測方法對這些標志物進行深入的檢測與分析。

1.2 需要更高靈敏度
循環(huán)腫瘤DNA（ctDNA）的濃度在不同個體和腫瘤類型中表現出顯著的差異性，最小等位基因頻率（Minor Allele Frequency, MAF）跨度從0.1%到10%。鑒于這種廣泛的濃度差異，為了準確捕捉和分析這些微小的遺傳變化，對檢測則需要更高的靈敏度。

1.3 需要覆蓋更多的檢測信息
液體活檢的樣本彌足珍貴，因此在檢測過程中，希望利用最小的樣本量來盡可能的獲取更豐富的樣本檢測信息。

02 Crystal Digital PCR^®為液體活檢提供精準便捷的解決方案

Fig. 2 Crystal Digital PCR^®的工作流程

2.1 讓基因突變檢測更加簡單高效
全流程時間（Total Time of Testing, ToT）僅需3小時，即可全面覆蓋各類基因突變，檢測靈敏度達0.1%。同時，檢測方案兼具多重檢測的高效性和超高性價比。操作流程簡潔明了，單一設備、單一耗材，單次加樣，極大簡化了檢測過程。

Fig. 3  Crystal Digital PCR^®基因突變檢測

2.2 提供兩種檢測策略滿足不同檢測需求
針對大規(guī)模樣本檢測：例如，在檢測ESR1基因時，采用Ruby芯片，能夠實現單次檢測384個樣本，提供高樣本通量解決方案。

針對多基因組合檢測：單個樣本檢測，能夠同時檢測超過100種基因靶標，實現高效的多重基因檢測。

Fig. 4  Crystal Digital PCR^®兩種檢測策略

2.3 對低濃度、稀有突變有高靈敏檢出(MAF 0.05%)
在常規(guī)條件下，液體活檢樣本的濃度通常為0.5至3ng/ul。測試樣本濃度分別為0.4ng/ul、0.8ng/ul和1.75ng/ul，對應的最小等位基因頻率（MAF）覆蓋了從0%到2%，包括0.05%、0.1%、0.5%、1%等關鍵點。無論樣本濃度如何，都能夠實現至少0.05%最小等位基因頻率（MAF）高靈敏度檢測，并且在低濃度樣本中也展現出卓越的重復性和穩(wěn)定性。

Fig. 5  BRAF,KRAS,NRAS突變檢測結果

2.4 Crystal高階多重技術確保了多重靶標檢測結果的一致性
7色熒光*，可實現單孔高達21種靶標的多重檢測。結合軟件的自動化分析，有效降低了熒光信號間的干擾，使得單次檢測能夠提供更為豐富和精確的信息。

采用熒光多重組合，ESR-1突變檢測試劑實現了對18個靶標（17種ESR-1突變靶標和1個參考基因靶標）的高效檢測。檢測結果表明，與較低多重檢測方法相比，高階多重檢測展現了良好的結果一致性和MAF相關性。

Fig. 6  ESR-1高階多重檢測結果

“所見即所得”——可視化質控系統能夠全面追蹤微滴的數量、分布和體積，軟件自動化功能有效識別并排除假陽性微滴，從而大幅提升檢測結果的可信度和可靠性。在三次重復實驗中，我們以0.05%的變異等位基因頻率（VAF）成功確認了Y537N突變的存在。.

Fig. 7 ESR-1 Y537N 0.05%的變異等位基因頻率(VAF)

2.5 與NGS比有更高的靈敏性和精準性
對于低MAF的樣本，Crystal Digital PCR^®比下一代測序（NGS）展現出更高的靈敏性和定量精準性。

Fig. 8  ESR-1 D538G dPCR對比NGS檢測結果

2.6 Flex探針技術極大降低熒光串擾及開發(fā)成本

Fig. 9  通用熒光報告系統

通用熒光報告系統由兩部分組成——引物和通用報告基團。與Taqman探針系統相比，通用熒光報告系統在不同檢測panel的研發(fā)與生產過程中，無需合成新的探針，從而大幅節(jié)省了研發(fā)和生產成本。

03 Crystal Digital PCR^®系統提供的解決方案及其卓越價值

• Crystal Digital PCR^®實現對低濃度樣本和稀有突變的高靈敏度檢測。

• Crystal Digital PCR^®的超高通量檢測最大程度地從珍稀樣本中提取更豐富的樣本信息。

• Crystal Digital PCR^®簡化的工作流程和最少的操作時間，顯著降低了實驗的可變性。

• Crystal Digital PCR^®的靈活樣本通量使您能夠選擇合適的技術，以達到所需的靈敏度和精準度。

• 相較于其他技術或dPCR系統，Crystal Digital PCR^®在液體活檢應用中極大的節(jié)約檢測時間和成本。