嵌合抗原受體（CAR）是CAR-T/NK細(xì)胞的核心所在。一般由胞外抗原結(jié)合區(qū)（通常為scFv）、跨膜區(qū)以及胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)區(qū)構(gòu)成。CAR候選分子具備特異性識(shí)別腫瘤細(xì)胞表面抗原的能力，能讓CAR-T/NK細(xì)胞及其他經(jīng)CAR修飾的免疫細(xì)胞精確地瞄準(zhǔn)腫瘤細(xì)胞，從而降低對(duì)正常細(xì)胞的損害。當(dāng)CAR候選分子與腫瘤抗原相結(jié)合后，會(huì)激活免疫細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑，推動(dòng)免疫細(xì)胞發(fā)揮殺滅腫瘤細(xì)胞的功效。通過選取適宜的CAR候選分子，能夠增強(qiáng)免疫細(xì)胞的活化與增殖能力，提升抗腫瘤免疫反應(yīng)的成效。總之，CAR候選分子在腫瘤免疫治療中占據(jù)著舉足輕重的地位，為實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)、高效的腫瘤治療奠定了重要基石。

選擇合適的抗原結(jié)合域是構(gòu)建CAR候選分子的關(guān)鍵步驟之一，需要考慮以下幾個(gè)方面：

腫瘤特異性：抗原結(jié)合域應(yīng)能夠特異性地識(shí)別腫瘤細(xì)胞表面的抗原，而與正常細(xì)胞的交叉反應(yīng)最小化。例如，對(duì)于某些血液腫瘤，CD19是一個(gè)較為理想的靶點(diǎn)，因?yàn)樗�在B細(xì)胞惡性腫瘤中高表達(dá)，而在正常造血干細(xì)胞中不表達(dá)。

親和力和特異性：選擇具有高親和力和特異性的抗原結(jié)合域，以確保CAR-T/NK細(xì)胞能夠有效地識(shí)別和結(jié)合腫瘤細(xì)胞。可以通過噬菌體展示、酵母展示或其他技術(shù)篩選出具有所需特性的單鏈抗體片段（scFv）。

抗原表達(dá)水平：考慮腫瘤細(xì)胞表面抗原的表達(dá)水平。理想的抗原應(yīng)該在腫瘤細(xì)胞上高表達(dá)，以增加CAR-T/NK細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞的結(jié)合機(jī)會(huì)。例如，在某些實(shí)體瘤中，HER2等抗原的表達(dá)水平可能因腫瘤類型和個(gè)體差異而有所不同，因此需要選擇在特定腫瘤中高表達(dá)的抗原作為靶點(diǎn)。

腫瘤異質(zhì)性：腫瘤細(xì)胞往往具有異質(zhì)性，即不同的腫瘤細(xì)胞可能表達(dá)不同的抗原。因此，選擇的抗原結(jié)合域應(yīng)能夠識(shí)別多種腫瘤細(xì)胞亞群，以提高治療的效果。例如，在黑色素瘤中，除了常見的靶點(diǎn)如NY-ESO-1外，還可以考慮其他腫瘤相關(guān)抗原，以應(yīng)對(duì)腫瘤的異質(zhì)性。

免疫原性：盡量選擇免疫原性較低的抗原結(jié)合域，以減少機(jī)體對(duì)CAR-T/NK細(xì)胞的免疫排斥反應(yīng)。一些人源化或全人源的抗體片段可能具有較低的免疫原性。

臨床前研究數(shù)據(jù)：參考已有的臨床前研究數(shù)據(jù)，了解不同抗原結(jié)合域在動(dòng)物模型中的療效和安全性。這些數(shù)據(jù)可以為選擇合適的抗原結(jié)合域提供重要的參考依據(jù)。

為了助力CAR候選分子的篩選，加速細(xì)胞治療研發(fā)進(jìn)程，逐典生物精心打造CAR候選分子開發(fā)解決方案，服務(wù)包括scFv/sdAb 抗體發(fā)現(xiàn)與優(yōu)化、細(xì)胞因子序列設(shè)計(jì)及轉(zhuǎn)讓授權(quán)，助推您快速順利獲得具有合適親和力和高特異性的人源化CAR候選抗體分子和具有特定功能的細(xì)胞因子序列。

scFv/sdAb候選分子開發(fā)服務(wù)

為了快速且高性價(jià)比地獲得合適親和力的CAR候選分子，逐典生物采用噬菌體篩選的方式進(jìn)行CAR候選分子的篩選，噬菌體篩選具有以下顯著優(yōu)勢(shì)：

高效性：能夠在短時(shí)間內(nèi)從龐大的抗體庫中篩選出目標(biāo)分子。

特異性強(qiáng)：可以精確地識(shí)別和篩選出針對(duì)特定抗原的分子。

庫容巨大：能夠構(gòu)建包含數(shù)十億甚至更多不同 scFv 的噬菌體庫，大大增加了找到理想抗體的可能性。

易于操作和改造：篩選過程相對(duì)簡便，并且可以通過基因工程技術(shù)對(duì)噬菌體進(jìn)行修飾和優(yōu)化。

成本相對(duì)較低：相較于其他一些篩選技術(shù)，噬菌體篩選所需的試劑和設(shè)備成本較為經(jīng)濟(jì)實(shí)惠。

可重復(fù)性好：只要遵循相同的操作流程和條件，就能夠獲得較為穩(wěn)定和可重復(fù)的篩選結(jié)果。

服務(wù)流程

以scFv為例，首先構(gòu)建噬菌體抗體庫：逐典生物擁有全面的免疫原設(shè)計(jì)&制備平臺(tái)以及獨(dú)有的六聚體免疫技術(shù)，可以顯著增強(qiáng)動(dòng)物免疫效果，提高免疫效價(jià)，為構(gòu)建高庫容的噬菌體展示文庫打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。從經(jīng)過免疫的小鼠或羊駝中獲取淋巴細(xì)胞，提取RNA并反轉(zhuǎn)錄為cDNA，通過PCR擴(kuò)增抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)基因，將其連接成單鏈抗體片段基因并插入噬菌體載體，之后利用目標(biāo)抗原對(duì)噬菌體進(jìn)行多輪篩選和淘洗，獲得目標(biāo)分子。逐典生物可提供靈活的體外效價(jià)檢測(cè)方案和BLI/SPR親和力排序，確保篩選到合適的分子序列。之后根據(jù)具體項(xiàng)目需求進(jìn)行抗體片段化，人源化基因改造和抗體親和力成熟，重組表達(dá)之后交付純化抗體。

服務(wù)詳情

CAR候選分子人源化案例分享

項(xiàng)目目的：對(duì)篩選到的原始序列進(jìn)行人源化改造，要求同時(shí)獲取親和力保持和親和力降低的人源化序列

項(xiàng)目結(jié)果：在客戶要求的交付時(shí)間內(nèi)，成功交付親和力保持和親和力降低的人源化序列。

細(xì)胞因子序列轉(zhuǎn)讓&開發(fā)服務(wù)

為增強(qiáng)CAR-T細(xì)胞療法的效果，一系列創(chuàng)新的CAR設(shè)計(jì)應(yīng)運(yùn)而生，旨在強(qiáng)化抗腫瘤的效率，克服因CAR-T細(xì)胞擴(kuò)增、浸潤和持久性欠佳而產(chǎn)生的治療耐藥性。在此背景下，第四代 CAR（即裝甲型 CAR）正在積極研發(fā)之中，它整合了細(xì)胞因子（像 IL-7、IL-15 或者 IL-21 等），用以提升CAR-T細(xì)胞的持久性、腫瘤靶向性以及抗腫瘤能力。另外，還有一種策略是通過讓CAR-T細(xì)胞表達(dá)趨化因子受體或者趨化因子（比如 CCL19、CCL21）來對(duì)其進(jìn)行修飾，引導(dǎo)CAR-T細(xì)胞到達(dá)腫瘤所在部位。

然而，野生型的細(xì)胞因子的一些短板比如無偏向性、構(gòu)象不穩(wěn)定等限制了細(xì)胞激活、擴(kuò)增的效果甚至是第四代CAR-T分子的構(gòu)建。為了解決野生型細(xì)胞因子的難題，逐典生物依托AI蛋白設(shè)計(jì)和表達(dá)平臺(tái)，提供定制化細(xì)胞因子開發(fā)和表達(dá)服務(wù)。此外，逐典生物已對(duì)部分常用的野生型的細(xì)胞因子序列進(jìn)行改造，比如，改造后的IL-15 Pro相比野生型，活性可提高20倍。改造后的IL-2 Pro可實(shí)現(xiàn)偏向性地結(jié)合不同的IL-2受體，從而優(yōu)先激活CD8+T細(xì)胞或者優(yōu)先激活Treg細(xì)胞，可有效調(diào)控免疫細(xì)胞的應(yīng)答。