題目：Thrombospondin-1 counteracts the p97 inhibitor CB-5083 in colon carcinoma cells
期刊：Cell cycle
作者：Nam-Gu Her, Santosh Kesari & Elmar Nurmemmedov
單位：韓國放射醫(yī)學研究所放射生物醫(yī)學研究院
前言：
    在抗癌治療過程中，癌細胞對蛋白酶體抑制劑的耐藥性會使得抗癌療法在臨床應用中無效。但潛在的機制仍需進行深入的研究。
    由于p97在蛋白質(zhì)穩(wěn)態(tài)調(diào)節(jié)中具有重要的功能，抑制p97能夠引起細胞的蛋白毒性應激，因此研究人員最近將其作為癌癥的治療靶點并進行相關的研究。CB-5083是一種有效的、選擇性的ATP競爭性p97抑制劑。已有多項研究表明，CB-5083的抗腫瘤活性與p97 mRNA和蛋白表達水平密切相關。但是，細胞對p97抑制敏感性的潛在調(diào)節(jié)機制仍未得到充分的研究。
    在本文中，研究人員證明血小板反應蛋白-1（THBS1）是一個CB-5083上調(diào)的基因，有助于賦予HCT116細胞對CB-5083的抗性。CB-5083能夠顯著增強THBS1的穩(wěn)態(tài)豐度。阻斷THBS1誘導使細胞對CB-5083介導的生長抑制敏感。抑制THBS1導致CB-5083誘導的Caspase 3/7活性增加，表明其功能與p97抑制下的癌細胞存活有關。總體而言，本文證明了THBS1在細胞對p97抑制的敏感性上起著重要的作用。
 
本文用到的實驗方法如下：  
結論：
    本文通過多種方法研究表明，THBS1通過增加其蛋白表達水平對p97的抑制提供了保護機制，從而提示了對p97抑制治療的新抗性機制。THBS1提供了保護性內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激反應，能夠發(fā)揮與ERAD相反的功能，并能使得細胞逃逸凋亡。當敲低THBS1后，HCT116細胞對CB-5083的抑制敏感，并且研究結果也表明，si THBS1的作用只有對CB-5083處理后的細胞作用明顯，且細胞無法獲得p97抑制劑的耐藥性。
    總而言之，本文為CB-5083的治療潛力及其耐藥機制提供了新的見解。

文中對細胞增殖的測定是通過自動細胞計數(shù)儀FACSCOPE B每隔24h對細胞進行計數(shù)得到的結果，結果如下圖所示：
那么FACSCOPE B有何種優(yōu)勢呢？
    FACSCOPE B是一種基于明場顯微鏡技術的全自動細胞計數(shù)系統(tǒng)，用于哺乳動物細胞計數(shù)。FACSCOPE B 采用高功率LED光源， CMOS圖像檢測 (5MP)， 精準的XYZ軸以及 on-slide圖像處理技術，能用于快速準確的細胞分析。
    使用FACSCOPE B進行細胞計數(shù)分為3步，(1)細胞染色，(2)上樣，(3)計數(shù)。細胞與臺盼藍染料混合，以區(qū)分活細胞和死細胞。將染色的樣品加入一次性塑料計數(shù)片中(每張計數(shù)片4次測試)，并將計數(shù)片插入FACSCOPE B進行計數(shù)。插入計數(shù)片后，光學系統(tǒng)自動聚焦在計數(shù)片上，然后FACSCOPE B自動采集和分析圖像。精確的XYZ軸通過預設路線移動，為每個通道拍攝多個圖像。高靈敏度的CMOS傳感器采集明場顯微鏡圖像，并將圖像發(fā)送到集成系統(tǒng)進行圖像處理和分析。整個計數(shù)過程需要2分鐘，計數(shù)結果顯示在儀器正面的LCD面板上。