ELISA試驗(yàn)過(guò)程中洗板機(jī)洗板注意點(diǎn)
優(yōu)化ELISA的重點(diǎn)之一在于洗滌。洗滌步驟可降低未結(jié)合抗體所引起的背景信號(hào)，從而增加分析的信噪比。每一步之間的洗滌確保只有特異的結(jié)合事件被保留，在最后一步產(chǎn)生信號(hào)。不充分的洗滌會(huì)導(dǎo)致差異和高背景，從而帶來(lái)不理想的結(jié)果。 在做ELISA實(shí)驗(yàn)時(shí)，洗板操作合乎要求，能得到正確、可靠的結(jié)果。
ELISA試驗(yàn)過(guò)程中洗板機(jī)洗板人為因素少，速度快，條件恒定，但是使用洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)注意以下三個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)。
1、洗滌參數(shù)
主要的參數(shù)是洗滌量。自動(dòng)洗板機(jī)會(huì)分配洗滌液。如果你之前遭遇過(guò)高背景，那么不要猶豫，將洗滌量調(diào)為高，最好是比包被體積更高。太少的洗滌液會(huì)讓一部分分析表面洗滌不到，從而明顯增加背景。所有反應(yīng)孔的洗滌量必須相同。
建議使用350µl洗滌液進(jìn)行洗滌，以便清潔整個(gè)反應(yīng)孔的壁。一般來(lái)說(shuō)，洗滌量越高，則孵育步驟殘留的抗體或抗原量就越少。
2、洗滌次數(shù)
影響洗滌效果的主要參數(shù)是洗滌循環(huán)的量。當(dāng)然，洗滌次數(shù)越多，背景越低。然而，太多次的洗滌會(huì)降低信號(hào)強(qiáng)度，使其難以測(cè)定。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復(fù)洗滌三次。不過(guò)，一般而言，包被平板需要的洗滌次數(shù)比用戶包被的平板要少。對(duì)于用戶包被的ELISA板，必須優(yōu)化洗滌次數(shù)。
控制洗滌量和洗滌次數(shù)的另一種方法是加入過(guò)量的洗滌液。一般來(lái)說(shuō)，96孔板的每個(gè)孔能容納330至460 µl。不過(guò)，有些自動(dòng)化洗板機(jī)可設(shè)置程序，分配遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出這個(gè)量的洗滌液，比如1 ml。它是如何做到的呢？其實(shí)很簡(jiǎn)單，就是在分液的同時(shí)打開吸液功能。換句話說(shuō)，隨著分液器分配更多的液體，抽吸器也將液體吸出。這種技術(shù)能增加洗滌量，但不會(huì)溢出到其他孔中。
3、抽吸
還有一些參數(shù)會(huì)影響洗滌步驟的效果。這些參數(shù)包括吸液高度和吸入位置，這兩者都能調(diào)整，以降低背景（殘留量）和差異。
殘留液體中包含未結(jié)合的抗原或抗體，它們會(huì)增加背景信號(hào)。殘留量越小，殘留液體越少，轉(zhuǎn)移到下一步的干擾液體也就越少。
吸液高度會(huì)明顯影響殘留量；如果洗滌吸頭與反應(yīng)孔底部的距離稍大，那就會(huì)讓殘留量急劇增加。反之，如果洗滌吸頭壓著反應(yīng)孔底部，那么也會(huì)使吸液效率降低，殘留量增加。
目前的洗板機(jī)一般使用兩種類型的洗頭：剛性和浮動(dòng)。浮動(dòng)洗頭中的吸頭可在洗滌過(guò)程中自由上下移動(dòng)，而剛性洗頭則固定在適當(dāng)?shù)奈恢谩Ｊ褂脛傂韵搭^的洗滌操作在優(yōu)化起來(lái)更為復(fù)雜，因?yàn)槟阈枰浅Ｗ屑?xì)地調(diào)整吸液高度。如果你們實(shí)驗(yàn)室使用幾種不同的板，那可能會(huì)很耗時(shí)。在使用浮動(dòng)洗頭時(shí)，吸頭會(huì)降到反應(yīng)孔的底部。調(diào)整高度就不是很重要，因此洗頭會(huì)下降到底部。
抽吸的位置也對(duì)殘留量有著重要影響；如果每個(gè)孔只使用一個(gè)抽吸點(diǎn)（這很常見(jiàn)，因?yàn)楦欤敲闯槲奈恢眯枰獌?yōu)化。最佳的位置取決于洗頭的性狀，但它幾乎不在反應(yīng)孔的中間，即使這是所有洗頭最常見(jiàn)的默認(rèn)位置。一般來(lái)說(shuō)，最佳位置在孔中間與孔壁之間的某處。反應(yīng)孔的形狀也會(huì)影響殘留量。C形底（平底圓角）的微孔板一般會(huì)比那些平底尖角的微孔板殘留量更低。
洗板時(shí)注意事項(xiàng)：
1.需每天校正注液量及殘液量，洗滌后殘液量不得大于2 μl。
2.及時(shí)更換破損吸液針，避免破壞底板包被。
3.針對(duì)不同廠家酶標(biāo)板注意調(diào)整吸液頭下降高度，避免沖洗針頭卡住酶標(biāo)板。
4.注意調(diào)整洗液量，洗液量過(guò)多將溢出，過(guò)少將達(dá)不到洗滌效果。
5.關(guān)機(jī)前使用蒸餾水沖洗管道，避免洗液的結(jié)晶物堵塞管道。
6.不同種試劑盒的洗液嚴(yán)禁混合使用。
為了洗滌效果較好，實(shí)驗(yàn)室可采用機(jī)器與人工洗滌相結(jié)合的方法，在機(jī)器洗滌后再進(jìn)行人工洗板1～2次，能達(dá)到理想的洗滌效果。ELISA看起來(lái)很簡(jiǎn)單，但是在實(shí)際操作過(guò)程中，絕不能掉以輕心，除了嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范的實(shí)驗(yàn)操作，高品質(zhì)的試劑盒與專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)也是獲得準(zhǔn)確結(jié)果的保證！
ELISA試驗(yàn)過(guò)程中洗板機(jī)洗板人為因素少，速度快，條件恒定，但是使用洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)注意以下三個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)。
1、洗滌參數(shù)
主要的參數(shù)是洗滌量。自動(dòng)洗板機(jī)會(huì)分配洗滌液。如果你之前遭遇過(guò)高背景，那么不要猶豫，將洗滌量調(diào)為高，最好是比包被體積更高。太少的洗滌液會(huì)讓一部分分析表面洗滌不到，從而明顯增加背景。所有反應(yīng)孔的洗滌量必須相同。
建議使用350µl洗滌液進(jìn)行洗滌，以便清潔整個(gè)反應(yīng)孔的壁。一般來(lái)說(shuō)，洗滌量越高，則孵育步驟殘留的抗體或抗原量就越少。
2、洗滌次數(shù)
影響洗滌效果的主要參數(shù)是洗滌循環(huán)的量。當(dāng)然，洗滌次數(shù)越多，背景越低。然而，太多次的洗滌會(huì)降低信號(hào)強(qiáng)度，使其難以測(cè)定。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復(fù)洗滌三次。不過(guò)，一般而言，包被平板需要的洗滌次數(shù)比用戶包被的平板要少。對(duì)于用戶包被的ELISA板，必須優(yōu)化洗滌次數(shù)。
控制洗滌量和洗滌次數(shù)的另一種方法是加入過(guò)量的洗滌液。一般來(lái)說(shuō)，96孔板的每個(gè)孔能容納330至460 µl。不過(guò)，有些自動(dòng)化洗板機(jī)可設(shè)置程序，分配遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出這個(gè)量的洗滌液，比如1 ml。它是如何做到的呢？其實(shí)很簡(jiǎn)單，就是在分液的同時(shí)打開吸液功能。換句話說(shuō)，隨著分液器分配更多的液體，抽吸器也將液體吸出。這種技術(shù)能增加洗滌量，但不會(huì)溢出到其他孔中。
3、抽吸
還有一些參數(shù)會(huì)影響洗滌步驟的效果。這些參數(shù)包括吸液高度和吸入位置，這兩者都能調(diào)整，以降低背景（殘留量）和差異。
殘留液體中包含未結(jié)合的抗原或抗體，它們會(huì)增加背景信號(hào)。殘留量越小，殘留液體越少，轉(zhuǎn)移到下一步的干擾液體也就越少。
吸液高度會(huì)明顯影響殘留量；如果洗滌吸頭與反應(yīng)孔底部的距離稍大，那就會(huì)讓殘留量急劇增加。反之，如果洗滌吸頭壓著反應(yīng)孔底部，那么也會(huì)使吸液效率降低，殘留量增加。
目前的洗板機(jī)一般使用兩種類型的洗頭：剛性和浮動(dòng)。浮動(dòng)洗頭中的吸頭可在洗滌過(guò)程中自由上下移動(dòng)，而剛性洗頭則固定在適當(dāng)?shù)奈恢谩Ｊ褂脛傂韵搭^的洗滌操作在優(yōu)化起來(lái)更為復(fù)雜，因?yàn)槟阈枰浅Ｗ屑?xì)地調(diào)整吸液高度。如果你們實(shí)驗(yàn)室使用幾種不同的板，那可能會(huì)很耗時(shí)。在使用浮動(dòng)洗頭時(shí)，吸頭會(huì)降到反應(yīng)孔的底部。調(diào)整高度就不是很重要，因此洗頭會(huì)下降到底部。
抽吸的位置也對(duì)殘留量有著重要影響；如果每個(gè)孔只使用一個(gè)抽吸點(diǎn)（這很常見(jiàn)，因?yàn)楦欤敲闯槲奈恢眯枰獌?yōu)化。最佳的位置取決于洗頭的性狀，但它幾乎不在反應(yīng)孔的中間，即使這是所有洗頭最常見(jiàn)的默認(rèn)位置。一般來(lái)說(shuō)，最佳位置在孔中間與孔壁之間的某處。反應(yīng)孔的形狀也會(huì)影響殘留量。C形底（平底圓角）的微孔板一般會(huì)比那些平底尖角的微孔板殘留量更低。
洗板時(shí)注意事項(xiàng)：
1.需每天校正注液量及殘液量，洗滌后殘液量不得大于2 μl。
2.及時(shí)更換破損吸液針，避免破壞底板包被。
3.針對(duì)不同廠家酶標(biāo)板注意調(diào)整吸液頭下降高度，避免沖洗針頭卡住酶標(biāo)板。
4.注意調(diào)整洗液量，洗液量過(guò)多將溢出，過(guò)少將達(dá)不到洗滌效果。
5.關(guān)機(jī)前使用蒸餾水沖洗管道，避免洗液的結(jié)晶物堵塞管道。
6.不同種試劑盒的洗液嚴(yán)禁混合使用。
為了洗滌效果較好，實(shí)驗(yàn)室可采用機(jī)器與人工洗滌相結(jié)合的方法，在機(jī)器洗滌后再進(jìn)行人工洗板1～2次，能達(dá)到理想的洗滌效果。ELISA看起來(lái)很簡(jiǎn)單，但是在實(shí)際操作過(guò)程中，絕不能掉以輕心，除了嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范的實(shí)驗(yàn)操作，高品質(zhì)的試劑盒與專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)也是獲得準(zhǔn)確結(jié)果的保證！
- 心肌肌鈣蛋白T（cTnT）與心肌肌鈣蛋白I（cTnI）的區(qū)別及臨床應(yīng)用
- 心肌肌鈣蛋白I（cTnI）的分子特性、病理機(jī)制及臨床診斷價(jià)值
- 腫瘤標(biāo)志物CA125在卵巢癌早期診斷中的應(yīng)用
- 腸道黏蛋白MUC2從黏液屏障到疾病開關(guān)的雙重作用機(jī)制
- S100β蛋白作為神經(jīng)保護(hù)和疾病推手的雙面作用機(jī)制及對(duì)疾病的影響
- 虛擬篩選、分子對(duì)接及分子動(dòng)力學(xué)模擬技術(shù)在 PROTAC 開發(fā)中的應(yīng)用
- Calbryte熒光探針的作用機(jī)制、優(yōu)勢(shì)及應(yīng)用場(chǎng)景
- 腦鈉肽（BNP）的特性、生物機(jī)制及臨床應(yīng)用價(jià)值
- 美德聲推出分子生物學(xué)診斷解決方案，含多款檢測(cè)試劑
- 尚睿生物618產(chǎn)品年中大促,免費(fèi)試等活動(dòng)鉅惠來(lái)襲
- MCE攜手華東師范大學(xué)打造AI藥物探索聯(lián)合實(shí)驗(yàn)室
- 棱鏡泰克19款流式試劑獲證，產(chǎn)品矩陣擴(kuò)至51款
- 美德聲推出多款基于新一代測(cè)序技術(shù)的體外診斷試劑盒
- 默瑞生物VivoMatter基質(zhì)膠產(chǎn)品試用活動(dòng)進(jìn)行中
- MCE中國(guó)將攜試劑產(chǎn)品亮相美國(guó)芝加哥2025 AACR年會(huì)
- 2024年"MCE中國(guó)生命科學(xué)研究促進(jìn)獎(jiǎng)"評(píng)獎(jiǎng)結(jié)果公布
Copyright(C) 1998-2025 生物器材網(wǎng) 電話：021-64166852;13621656896 E-mail：info@bio-equip.com