WB結(jié)果中雜帶較多及信號問題解析參考
1、WB結(jié)果中雜帶較多
可能的原因及建議：
①目的蛋白存在多個修飾位點(磷酸化位點、糖基化位點等等)，本身可以出現(xiàn)多條帶。查文獻或生物信息學分析，獲得蛋白序列的修飾位點信息，去除修蛋白飾后確定蛋白實際大小，這個需要一定的生物化學基礎(chǔ)和生信分析能力。
②目的蛋白有其它剪切本，查閱文獻或生物信息學分析其可能性。
③樣本處理過程中目的蛋白發(fā)生降解，加入蛋白酶抑制劑；樣本處理在冰上操作。
④上樣量過高，過于敏感，適當減少上樣量。
⑤一抗特異性不高，重新選擇或制備高特異性的抗體。
⑥一抗不純，純化抗體。
⑦一抗或者二抗?jié)舛绕撸m當降低抗體濃度。
2、WB結(jié)果中無信號或顯示信號弱
可能的原因及建議：
①你所檢測的樣本中不表達目的蛋白，選擇表達量高的細胞作為陽性對照，用于確定檢測樣本是否為陰性，同時查閱文獻。
②檢測樣本低表達目的蛋白，提高上樣量，裂解液中注意加入蛋白酶抑制劑。
③轉(zhuǎn)移不完全或過轉(zhuǎn)移，可以用麗春紅染膜并結(jié)合染膠(考馬斯亮藍)后確定條帶是否轉(zhuǎn)至膜上或轉(zhuǎn)移過頭；適當調(diào)整轉(zhuǎn)膜的時間和電流。
④抗體不能識別測試種屬的相關(guān)蛋白，購買抗體前應(yīng)當認真閱讀抗體說明書，確定其是否能夠交叉識別測試種屬的對應(yīng)蛋白。
⑤一抗孵育時間不足，建議4℃結(jié)合過夜。
⑥二抗與一抗不匹配，選擇針對一抗來源的種屬的抗體。
⑦洗膜過度，洗膜時間不宜過長，加入的去垢劑不宜過強或過多，建議使用0.1%的弱去垢劑Tween-20。
可能的原因及建議：
①目的蛋白存在多個修飾位點(磷酸化位點、糖基化位點等等)，本身可以出現(xiàn)多條帶。查文獻或生物信息學分析，獲得蛋白序列的修飾位點信息，去除修蛋白飾后確定蛋白實際大小，這個需要一定的生物化學基礎(chǔ)和生信分析能力。
②目的蛋白有其它剪切本，查閱文獻或生物信息學分析其可能性。
③樣本處理過程中目的蛋白發(fā)生降解，加入蛋白酶抑制劑；樣本處理在冰上操作。
④上樣量過高，過于敏感，適當減少上樣量。
⑤一抗特異性不高，重新選擇或制備高特異性的抗體。
⑥一抗不純，純化抗體。
⑦一抗或者二抗?jié)舛绕撸m當降低抗體濃度。
2、WB結(jié)果中無信號或顯示信號弱
可能的原因及建議：
①你所檢測的樣本中不表達目的蛋白，選擇表達量高的細胞作為陽性對照，用于確定檢測樣本是否為陰性，同時查閱文獻。
②檢測樣本低表達目的蛋白，提高上樣量，裂解液中注意加入蛋白酶抑制劑。
③轉(zhuǎn)移不完全或過轉(zhuǎn)移，可以用麗春紅染膜并結(jié)合染膠(考馬斯亮藍)后確定條帶是否轉(zhuǎn)至膜上或轉(zhuǎn)移過頭；適當調(diào)整轉(zhuǎn)膜的時間和電流。
④抗體不能識別測試種屬的相關(guān)蛋白，購買抗體前應(yīng)當認真閱讀抗體說明書，確定其是否能夠交叉識別測試種屬的對應(yīng)蛋白。
⑤一抗孵育時間不足，建議4℃結(jié)合過夜。
⑥二抗與一抗不匹配，選擇針對一抗來源的種屬的抗體。
⑦洗膜過度，洗膜時間不宜過長，加入的去垢劑不宜過強或過多，建議使用0.1%的弱去垢劑Tween-20。
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