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細(xì)胞因子的作用特點(diǎn)及選型和使用注意事項(xiàng)

瀏覽次數(shù):1021 發(fā)布日期:2023-10-12  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

細(xì)胞因子(cytokine,CK)是免疫原、絲裂原或其他刺激劑誘導(dǎo)多種細(xì)胞產(chǎn)生的低分子量可溶性蛋白質(zhì),具有調(diào)節(jié)固有免疫和適應(yīng)性免疫、血細(xì)胞生成、細(xì)胞生長以及損傷組織修復(fù)等多種功能。

 

細(xì)胞因子具有以下作用特點(diǎn):

多向性和靶向性:一種細(xì)胞因子可由多種細(xì)胞產(chǎn)生,作用于不同的靶細(xì)胞。例如,IL-5既可以來源于Th2細(xì)胞,也可以來源于肥大細(xì)胞,既能活化B細(xì)胞增殖,又能促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞分化、成熟,

即時性:基本不儲存,隨時產(chǎn)生并發(fā)揮作用。

局部性:通常以自分泌或者旁分泌的形式作用于周圍細(xì)胞。

相互協(xié)調(diào):以網(wǎng)絡(luò)形式發(fā)揮作用,不同細(xì)胞因子間相互抑制或促進(jìn)。

多重調(diào)節(jié):發(fā)揮的效應(yīng)與細(xì)胞因子濃度、靶細(xì)胞類型、其他細(xì)胞因子種類以及種屬有關(guān)。

 

常見細(xì)胞因子的作用

名稱 功能
FGF 堿性成纖維細(xì)胞生長因子,bFGF,F(xiàn)GF basic 或 FGF 2 屬于一個大的 FGF 蛋白家族,后者與包括增殖、生長和分化的細(xì)胞發(fā)育的許多方面有關(guān)。FGF-basic 是一種維持胚胎干細(xì)胞在培養(yǎng)中保持未分化狀態(tài)的關(guān)鍵成分。
IL IL是一類能夠雙向調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的細(xì)胞因子家族,主要參與免疫細(xì)胞的分化和激活。IL可劃分為IL-1細(xì)胞因子家族、共γ鏈細(xì)胞因子家族、IL-10細(xì)胞因子家族、IL-12細(xì)胞因子家族等;
EGF 表皮生長因子,是一種有效的促有絲分裂因子,在體內(nèi)和體外的生長、增殖和各種表皮和上皮組織 和細(xì)胞培養(yǎng)中的一些成纖維細(xì)胞中起重要作用。EGF 產(chǎn)生的失調(diào)與某些癌癥的生長和進(jìn)展有關(guān)。
INF 干擾素,具有抗病毒、抑制細(xì)胞增殖、調(diào)節(jié)免疫及抗腫瘤作用。

 

由于天然的細(xì)胞因子表達(dá)量低,分泌具有短時自限性,難以收集提純,一般通過蛋白重組技術(shù)獲得,即先用基因克隆或化學(xué)合成技術(shù)獲得目的基因,連接到適合的表達(dá)載體,導(dǎo)入到特定的宿主細(xì)胞,利用宿主細(xì)胞的遺傳系統(tǒng),表達(dá)出有功能的蛋白質(zhì)分子。目前常用的有原核、真核、昆蟲、哺乳動物四種表達(dá)系統(tǒng)。

 

表達(dá)系統(tǒng) 特點(diǎn)
原核 產(chǎn)量高、蛋白常為包涵體,無翻譯后修飾,大分子蛋白表達(dá)困難
酵母 便于純化,部分翻譯后修飾有時出現(xiàn)蛋白切割問題,糖基化不能滿足要求
昆蟲 表達(dá)的大多數(shù)蛋白是可溶的,適合毒性蛋白,表達(dá)激酶等定位于細(xì)胞內(nèi)的真核蛋白
哺乳動物 完善的翻譯后加工,活性接近天然蛋白,技術(shù)要求高,表達(dá)量低

 

選擇細(xì)胞因子時要注意以下幾個問題:

·細(xì)胞因子作為動物免疫抗原進(jìn)行檢測類抗體的研究,蛋白純度需大于80%;若用于晶體及晶體結(jié)構(gòu)研究,蛋白純度需大于95%;

·若需選擇不同種屬來源的細(xì)胞因子,則要判斷兩種種屬的細(xì)胞是否有交叉反應(yīng)活性。一般來說,不同種屬之間蛋白同源性(序列一致性)在80%以上的基本上可確定為有交叉活性。

·根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇想要的產(chǎn)品時,我們還需要關(guān)注一下內(nèi)毒素的水平,特別是作為細(xì)胞添加物使用時。

 

許多老師在收到凍干粉之后由于保存或者溶解不當(dāng)造成實(shí)驗(yàn)結(jié)果不理想,小愛也遇到過很多老師詢問,產(chǎn)品室溫保存了兩個月還能用嗎?溶解不了怎么回事?細(xì)胞因子儲存和溶解其實(shí)都很簡單,愛必信的細(xì)胞因子說明書中給了明確標(biāo)注。

 

1.收到的凍干粉如何處理?

我們收到的凍干蛋白一般不會立即使用,這種情況下可放置-20℃儲存,室溫一般儲存三周左右,具體時間可參照說明書,請老師們妥善保存收到的產(chǎn)品。

 

2.凍干蛋白一般如何溶解?

敲黑板!!!溶解前,一定要將凍干粉離心收集于離心管底部,不同的凍干蛋白需要的溶解劑不同,比如,abs04698重組人IL4使用中蒸餾水即可溶解, abs04177 IGF-I蛋白需溶解在500mM乙酸中,這是由PH和離子濃度能多種因素決定的,大家一定要仔細(xì)閱讀說明書,此外,一定要溶解到說明書推薦的濃度范圍,否則可能會造成不完全溶解或活性減弱。

 

3.溶解方式

用槍頭輕輕捶打即可,對于相對較難溶解的,可以在低速搖床上靜止兩小時左右,切不可劇烈震蕩。
 

4.溶解后的蛋白如何儲存呢?

重組蛋白溶液一般可在4-7°C下儲存2-7天。避免反復(fù)凍融可將溶液分裝于聚丙烯管中(不會吸附蛋白),在<-20°C下穩(wěn)定保存3個月左右,適當(dāng)加入載體蛋白(BSA、HAS、FBS等)可減少管壁對重組蛋白的吸附損耗。

愛必信提供多種細(xì)胞因子,純度高、內(nèi)毒素含量低,品質(zhì)保證。可登錄官網(wǎng)了解更多信息。
 

abs細(xì)胞因子

發(fā)布者:上海優(yōu)寧維生物科技股份有限公司
聯(lián)系電話:4008-168-068
E-mail:hezq@univ-bio.com

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