新鮮/冷凍組織單細胞懸液分離試劑盒使用說明書
描述：
應用：
試劑盒組分(50T):
儲存：常溫運輸，4 度儲存。
所需附加材料
從新鮮和/或冷凍組織中獲得優質細胞懸浮液是后續實驗的重要步驟，如流式細胞術分析(FACS)和核酸純化。細胞懸浮液可以通過以下一種或三種方法從組織中分離出來:化學組織分離、酶消化和物理分離。許多方法都過于繁瑣和費時。最重要的是，組織中尤其是冷凍組織中的細胞，通常被破壞，表現出低完整性和低活性。很難從結締組織含量較高的冷凍樣品中獲取得高活性的細胞懸液，例如肝、腎、腦組織等。我們開發的這款試劑盒，簡單、快速、高效、無需特殊儀器，利用化學和物理分離機制將細胞從新鮮或冷凍的組織中分離出來。該試劑盒可在20分鐘內完成，可獲得具有較高完整性和活性的細胞懸液。
應用：
用該試劑盒獲得的細胞懸液可以用于 FACS 分析和其他應用。
試劑盒組分(50T):
1. 組織分離液 15ml
2. 1.5ml 離心管 50 個
3. 1.5ml 離心管的研磨杵 2 個
儲存：常溫運輸，4 度儲存。
所需附加材料
臺式離心機
FACS 緩沖液（1XPBS 中加入 5%牛血清白蛋白，0.01%疊氮化鈉）
40-100um 的細胞篩
操作方法：（將組織分離液和 FACS 緩沖液冰上預冷）
1. 取10-30毫克的組織置于試劑盒提供的1.5 ml離心管中。加入200μl預冷的組織分離液覆蓋組織，冰上孵育5-10分鐘。使用提供的研磨杵反復扭轉研磨組織100 – 200次（這個過程大約2-3分鐘）。研磨杵可重復使用，用清水清潔后，用紙巾擦干即可。不建議使用自備的1.5ml離心管，因為其他的1.5ml離心管和試劑盒提供的研磨杵可能不匹配。
2. 研磨后，500Xg，離心3分鐘，棄去上清液。用研磨杵將沉淀扭轉研磨100-150次。研磨杵放在管中，加入1ml的FACS緩沖液，將樣品再研磨幾次重懸。如前所述清潔并擦干研磨杵，以供將來使用。
3. 用1ml的吸頭上下吹打10 – 20次重懸細胞。將細胞懸液過40 - 100μm細胞篩（細胞篩的孔徑根據最終所需細胞大小選擇）。用低速離心(500Xg, 3min)收集細胞，再用適量的FACS緩沖液重懸細胞。 不要使用PBS重懸細胞，因為細胞非常脆弱。如果細胞不在FACS緩沖液或其他含血清的緩沖液（例如：含有10- 20%胎牛血清的組織培養基）中重懸，細胞的活力將受到顯著影響。
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