如果轉染結果不好,建議檢測您的細胞是否有支原體污染。
支原體污染細胞培養物會以多種方式影響您的細胞,其中大多數會降低實驗結果的可靠性、可重復性和一致性。在真核細胞中觀察到的一些影響可能包括:
由于營養匱乏而導致蛋白質、RNA 和 DNA 合成水平的改變
細胞形態的變化
細胞因子釋放增加(或減少)
支原體污染影響轉染效率
有數據表明[1],由于支原體污染對真核細胞的各種影響,與未污染的細胞相比,支原體污染的細胞轉染后具有較低的基因表達水平。
轉染效率降低很可能是支原體對其宿主細胞產生多種影響的結果,例如它們駐留在細胞膜中,從而調節細胞膜過程或爭奪營養物質。Yin等人最近證明[2],支原體污染使細胞轉染效率降低的部分原因是必需氨基酸 L-精氨酸的缺乏。這種 L-精氨酸缺乏是由微生物酶精氨酸脫亞胺酶 (ADI) 引起的,這種酶在支原體中含量豐富,它們負責支原體對 L-精氨酸的分解代謝。
下圖顯示了轉染GFP表達載體的Hela細胞,當細胞感染支原體(M. Fermantans)時,GFP表達水平顯著降低。
除此之外,牢記以下十大守則,遠離支原體污染!
MycoAlert™ 支原體檢測試劑盒為您的轉染效率提供支持
為確保您的細胞沒有支原體,建議每兩周定期進行一次支原體檢測。除了日常的監測外,我們強烈建議您在轉染實驗開始前檢測支原體,使用沒有支原體污染的細胞進行后續的實驗,從而進一步提升細胞轉染的效率和活率,減少實驗重復帶來的負面影響,為您的轉染實驗開一個好頭。
MycoAlert™ 支原體檢測試劑盒易于使用且易于集成到碎片化時間中。該檢測通過簡單的兩個步驟,通常可在 20 分鐘內獲得結果。作為一種選擇性生化檢測,其原理為測定支原體酶的活性。這些支原體酶廣泛存在于六種主要支原體細胞培養污染物和絕大多數 180 種支原體物種中,但不存在于真核細胞中。