BioPhase® 8800系統對不同長度環狀RNA疫苗的高通量純度分析
環狀RNA（CircRNA）以穩定性、免疫原性低，半衰期長、無需加帽和加尾等優勢吸引多家疫苗企業紛紛布局。毛細管電泳技術可有效分離CircRNA疫苗產品中CircRNA、前體線性RNA（Precursor RNA）、未成環RNA（Nicked RNA），是CircRNA疫苗質量控制的有力分析工具[1]。作為高通量的毛細管電泳分析系統，BioPhase® 8800 系統可在一個系統中通過8根平行的毛細管同時進行檢測分析，以8倍的通量獲得與PA 800 Plus同質量的數據，為生物工藝、分析開發和QA/QC提供高通量分析。
結果
使用同一長度（1765 nt）、不同純化階段的樣品考察CircRNA與其他雜質的分離，根據對照品遷移時間對樣品中Nicked RNA、Precursor RNA進行定性，CircRNA出峰最晚[1]，結果見圖1，CircRNA與Precursor RNA等雜質可實現良好的分離。通過BioPhase軟件對樣品中各峰進行積分，并以CircRNA校正峰面積占總峰面積的百分比表示純度，未純化和純化后的CircRNA樣品的純度分別為71.45%，92.44%。
利用CGE-LIF方法考察了三個不同長度（744 nt，1765 nt，3589 nt）的樣品中，CircRNA與其他雜質的分離情況，見圖2，峰1、3、5分別為744 nt，1765 nt，3589 nt的precursor RNA峰，峰2、4、6分別為744 nt，1765 nt，3589 nt的CircRNA峰（鑒定數據未展示）。對于Precursor RNA與CircRNA 的分離， CircRNA環狀構象體積起到主要的分離作用，由于長度越長，環狀構象體積越大，因此其與線性RNA的分離度也越大；對于Precursor RNA與Nicked RNA 的分離，由于兩者都是線性的結構，其分離度規律為長度越長，分離度越小。各峰的分離度統計結果見表1。
圖2. BioPhase® 8800 系統分離分析不同長度的CircRNA樣品。樣品A：744 nt；樣品B：1765 nt；樣品C：3589 nt；1、4、7號峰：Nicked RNA；2、5、8號峰：Precursor RNA；3、6、9號峰：CircRNA
注：MT：遷移時間；CAP%：校正峰面積百分比，即純度；R：分離度
結論
本文介紹了利用BioPhase® 8800 系統對CircRNA疫苗及產品相關雜質進行了高通量的分離分析
1
方法對不同長度的CircRNA樣品（700 nt-3600 nt）均可實現分離分析，且CircRNA長度越長，相應的Precursor RNA 與CircRNA分離度越大，Precursor RNA與Nicked RNA分離度越小；
2
方法可同時進行8個樣品的檢測分析，6小時可完成96個樣品的檢測，平均每個樣品用時為3.9 min，顯著提高了大量樣本的分析檢測效率；
3
方法可準確反映不同純化程度樣品中CircRNA的純度變化，以高效評價CircRNA疫苗的環化效率、純化工藝、產品質量等。該方案可更快速地評估樣品性質，加快產品從研發到上市的時間。
參考文獻
[1] SCIEX Tech Note：CGE-LIF方法對環狀RNA疫苗的純度分析（RUO-MKT-02-15386-ZH-B）
結果
使用同一長度（1765 nt）、不同純化階段的樣品考察CircRNA與其他雜質的分離，根據對照品遷移時間對樣品中Nicked RNA、Precursor RNA進行定性，CircRNA出峰最晚[1]，結果見圖1，CircRNA與Precursor RNA等雜質可實現良好的分離。通過BioPhase軟件對樣品中各峰進行積分，并以CircRNA校正峰面積占總峰面積的百分比表示純度，未純化和純化后的CircRNA樣品的純度分別為71.45%，92.44%。
圖1. BioPhase® 8800 系統分離分析不同純化階段的CircRNA樣品
利用CGE-LIF方法考察了三個不同長度（744 nt，1765 nt，3589 nt）的樣品中，CircRNA與其他雜質的分離情況，見圖2，峰1、3、5分別為744 nt，1765 nt，3589 nt的precursor RNA峰，峰2、4、6分別為744 nt，1765 nt，3589 nt的CircRNA峰（鑒定數據未展示）。對于Precursor RNA與CircRNA 的分離， CircRNA環狀構象體積起到主要的分離作用，由于長度越長，環狀構象體積越大，因此其與線性RNA的分離度也越大；對于Precursor RNA與Nicked RNA 的分離，由于兩者都是線性的結構，其分離度規律為長度越長，分離度越小。各峰的分離度統計結果見表1。
表1. 不同純化階段、不同長度的CircRNA樣品分析結果
結論
本文介紹了利用BioPhase® 8800 系統對CircRNA疫苗及產品相關雜質進行了高通量的分離分析
1
方法對不同長度的CircRNA樣品（700 nt-3600 nt）均可實現分離分析，且CircRNA長度越長，相應的Precursor RNA 與CircRNA分離度越大，Precursor RNA與Nicked RNA分離度越小；
2
方法可同時進行8個樣品的檢測分析，6小時可完成96個樣品的檢測，平均每個樣品用時為3.9 min，顯著提高了大量樣本的分析檢測效率；
3
方法可準確反映不同純化程度樣品中CircRNA的純度變化，以高效評價CircRNA疫苗的環化效率、純化工藝、產品質量等。該方案可更快速地評估樣品性質，加快產品從研發到上市的時間。
參考文獻
[1] SCIEX Tech Note：CGE-LIF方法對環狀RNA疫苗的純度分析（RUO-MKT-02-15386-ZH-B）
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