腦血管疾病在全球范圍內(nèi)已成為頭號殺手，可分為缺血性腦卒中和出血性腦卒中，其中缺血性腦卒中占85%。

缺血性腦卒中(ICVD)亦稱為缺血性腦血管病或腦梗死，是威脅人類健康與生存的主要疾病之一，是中老年人的常見病，并越來越趨向年輕化。具有發(fā)病率、死亡率、致殘率、復發(fā)率高的特點，是目前重點防治的一種疾病。大腦中動脈(MCA)為臨床上發(fā)生腦缺血損傷最常見的部位之一。故大腦中動脈阻塞(MCAO)模型被廣泛用于局灶性腦缺血的研究。用血管內(nèi)線栓阻斷法制備大鼠MCAO模型，已被腦血管疾病研究者廣泛接受和采用。

在栓塞后48小時內(nèi)至少有1/3患者出現(xiàn)自發(fā)性再灌注，一周時增加到一半或更多，無論是自發(fā)性再灌注還是溶栓后再灌注，都會產(chǎn)生一系列的更嚴重的級聯(lián)反應(yīng)：神經(jīng)體液調(diào)節(jié)的影響、生物活性物質(zhì)引起的非細菌性炎癥反應(yīng)，最終導致神經(jīng)細胞凋亡等不可逆損傷。所以目前動物疾病并模型較多采用線栓阻斷

大腦中動脈一定時間后拔出線栓引發(fā)再灌注的短暫腦缺血-再灌注模型。大鼠呼吸麻醉機進行麻醉，仰臥固定于手術(shù)板上。右頸部備皮、清洗，縱向剪開約3cm口，分離CCA、ICA及ECA并掛線備用，結(jié)扎ECA 與CCA , 用動脈夾夾閉ICA 遠心端后,迅速于ECA 與ICA 分叉處作一切口, 從切口處插入一端加熱成光滑球形尼龍線(直徑為0.25 mm, 距球端2 cm 處作標記)。線插入ICA 后, 于入口處稍稍結(jié)扎尼龍線與入口處ICA 段, 然后松開夾閉ICA 的動脈夾, 繼續(xù)插入尼龍線至稍有阻力后略回撤, 至線插入深度為(18.5 ±0.5)mm 左右, 實現(xiàn)大腦中動脈阻塞導致腦缺血。再次結(jié)扎入口處，尼龍線外留約1cm，縫合皮膚。45min后輕輕提拉所留線頭至有阻力，實現(xiàn)大腦中動脈再灌，則造模完成。假手術(shù)組大鼠只結(jié)扎ECA與ICA。

模型狀態(tài)

造模第二日多數(shù)模型大鼠口鼻會出現(xiàn)血性分泌物，表現(xiàn)為毛發(fā)干枯，精神倦怠，蜷縮懶動，且出現(xiàn)一定的死亡率。隨著時間的延長，大鼠狀態(tài)好轉(zhuǎn)，活動增多，毛發(fā)變順且有光澤，體重均有不同程度的增加。
 

檢測方法

造模完成后等待大鼠蘇醒，依據(jù)Zea longa 5分制標準篩選出2分或3分的腦缺血模型進入后續(xù)實驗。0分：無神經(jīng)功能缺損癥狀，活動正常;1分：不能伸展對側(cè)前爪;2分：爬行時出現(xiàn)向左轉(zhuǎn)圈;3分：行走時身體向偏癱側(cè)傾倒;4分：不能自發(fā)行走，意識喪失。

行為學指標目前常采用跳臺法、避暗法、穿梭箱法來測定動物一次性被動回避反射能力 ; Y 形水迷宮實驗、Morris水迷宮實驗等測定動物空間分辨學習記憶能力。研究血管性癡呆、腦卒中抑郁癥等可以選擇曠場試驗作為行為學檢測指標之一。

病理檢測常用HE染色觀察組織水腫炎癥反應(yīng)等，尼氏染色可以反應(yīng)神經(jīng)元細胞情況。

模型評價

水迷宮
 

在Morris水迷宮獲得性訓練、探查訓練和對位訓練中，各組間大鼠游泳潛伏期、游泳距離和游泳速度指標均無顯著差異。對位探查訓練中，與假手術(shù)組相比，模型組大鼠平臺所在象限時間百分比、平臺所在象限時間和進入平臺所在象限次數(shù)均顯著減小(P<0.05，P<0.01);
 

曠場試驗

曠場實驗結(jié)果顯示：與假手術(shù)組相比，模型組大鼠穿越格子數(shù)顯著增加(P<0.05);與模型組相比，陽性藥組大鼠穿越格子數(shù)顯著減少(P<0.01)。各組大鼠后肢站立次數(shù)和中央格停留時間均無顯著差異。

 

TTC染色

2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法觀察腦梗死灶：TTC染色后，未缺血部分呈玫瑰紅色，而腦梗死灶呈蒼白色，證實模型制作成功。結(jié)果顯示，與假手術(shù)組相比，模型組大鼠腦梗死面積顯著增加(P<0.01);與模型組相比，陽性藥組大鼠腦梗死面積有顯著減小(P<0.01)。

TTC染色
假手術(shù)組	模型組	陽性藥組

尼氏染色

神經(jīng)元尼氏體與細胞核呈藍紫色，背景呈淺藍色。結(jié)果顯示：假手術(shù)組海馬 CA1 區(qū)神經(jīng)元排列規(guī)整，神經(jīng)元胞體及樹突內(nèi)尼氏體豐富;實驗組神經(jīng)元排列紊亂，并伴有細胞水腫和壞死發(fā)生，尼氏體染色較淺，模糊不清;陽性藥組神經(jīng)元尼氏體排列較為規(guī)整，偶見神經(jīng)細胞水腫，和溶解。

附 圖
假手術(shù)組	模型組	陽性藥組