細胞劃痕實驗的原理、步驟及注意事項介紹
一、實驗原理
細胞劃痕（wound healing）法是簡捷測定細胞遷移遠動和修復能力的方法，類似體外傷口愈合模型，在體外培養皿或平板培養的單層貼壁細胞上，用微量槍頭或其它硬物在細胞生長的中央區域劃線，去除中央部分的細胞，然后繼續培養細胞至實驗設定的時間，取出細胞培養板，觀察周邊細胞的生長遷移能力，實驗通常需設定正常對照組和實驗組，實驗組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等的組別，通過不同分組之間的細胞對于劃痕區修復能力的不同可以判斷各組細胞的遷移與修復能力。
二、實驗步驟
1.所有要滅菌，直尺和 marker 筆在操作前紫外照射 30min。
2.先用 marker 筆在 6 孔板背后，用直尺比著，大約每隔 0.5-1cm 一道，橫穿過孔，每孔至少穿過 5 條線。
3.在空中加入約 5×105 個細胞（具體數量因細胞不同而不同，掌握為過夜能鋪滿），37°C 培養箱培養。
4.第二天用 10µl 槍頭比著直尺，與標記線垂直的方向劃兩條平行線，槍頭要垂直，不能傾斜。
5.用 PBS 洗細胞 3 次，去除劃下的細胞，加入無血清培養基。
三、注意事項
1.在用 PBS 緩沖液沖洗時，注意貼壁慢慢加入，以免沖散單層貼璧細胞，影響實驗拍照結果。
2.一般做劃痕實驗，都是無血清或者低血清(<2%），否則細胞增殖就不能忽略。（也可用絲裂酶處理一小時）
3.按照 6 孔板背后畫線的垂直方向劃痕，可以形成者干交叉點，作為固定的檢測點，以解決前后觀察時位置不固定的問題。
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