ELISA標準曲線法也稱為外標法或直接比較法，是一種簡便、快速的定量方法，在ELISA實驗中比較常用的一種分析方法。       

一、ELISA試劑盒做標準曲線樣品檢測時有幾個問題需要注意

1、樣品的濃度等指標是根據標準曲線計算出來的，所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事，否則后面的實驗結果無從談起。

2、設置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在標準曲線濃度范圍之內，人ELISA試劑盒包括上限和下限。而對于呈S型的標準曲線，盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度最陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內。

3、采用倍比稀釋法配制標準曲線中的標準樣品濃度，這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會出現較大的偏離。

4、檢測標準樣品時，應按濃度遞增順序進行，以減少高濃度對低濃度的影響，提高準確性。

5、標準曲線的樣品數一般為7個點，但至少要保證有5個點。

6、做出的標準曲線相關系數因實驗要求不同而有所變動，但一般來說，相關系數R至少要大于0.98，對于有些實驗，至少要0.99甚至是0.999.

二、ELISA試劑盒選擇什么方程去擬合

在S曲線的低濃度部門可以用乘冪方程很好的擬合，中低濃度部門可以用直線方程，中間部門可用對數方程，而中后段可用四參數。免疫檢測時尺度點(可以是倍比稀釋的，也可以不是)濃度假如和相應的吸光度(OD)值假如能夠呈現直線關系當然是理想的了，這時可以通過EXELL等利便的獲得擬合曲線，進而推算出樣品的濃度值。

關于尺度曲線的擬合方式，直線、二次曲線、三次曲線、指數、對數等雖都可用于ELISA及其它生物學反應中的曲線擬合，但都只合用于曲線的一部門，有的合用于前半段，有的合用于后半段，有的合用于中間一段，而Logistic曲線則對曲線的全部都有較好的合用性。在一個長的區間內，Logistic應該都能擬合得較為理想。假如用來定量，S形曲線的中間段(較陡處)是比較好的，而兩真個平坦部門計算誤差會大，有時甚至會很大。用于免疫檢測的所謂“尺度曲線"實在稱為擬合曲線比較合適。目前國際上流行的免疫檢測擬合方式是“四參數邏輯擬合"，用這種擬合方式往往能夠比較準確的反映濃度和吸光度的曲線關系，從而進一步比較準確的獲得樣品中待測物質的濃度值。但我們做免疫檢測很少有時候能夠有這么理想的情況，標品濃度和相應OD值往往是"ELISA試劑盒S"型的曲線關系，這時就不能用直線擬合的方式了，而對擬合方法進行選擇就是必要的了。樞紐在于你的尺度曲線做到了S形的哪一部門，你想檢測的樣品濃度在曲線的哪一部門。人ELISA試劑盒當然，假如用于定量，仍是在中間一段較好。但建模型是一回事，而用它來定量是另一回事。這些方法固然沒有一種方法可以通用，但也都可以用。但并不是說它就是萬能的。事實上不僅是ELISA試劑盒，其它良多生物學反應都是S形曲線，也都可以用Logistic曲線擬合。