論述PCR,RT-PCR及實時熒光定量PCR關(guān)聯(lián)
瀏覽次數(shù):282 發(fā)布日期:2023-1-10
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1、所說的PCR應(yīng)該就是最常規(guī)的PCR,以DNA為模板,通過上下游引物,實現(xiàn)DNA的擴增。
2、RT-PCR一般情況下是指反轉(zhuǎn)錄PCR(reverse transcription),盡管有些資料上說實時熒光定量PCR也(realtime fluores-cence quantitative PCR)也簡稱RT-PCR,但是這是不對的,不推薦。
基本操作過程是將所提取的RNA進行反轉(zhuǎn)錄,然后將所獲得的cDNA作為模板,設(shè)計引物進行擴增,是一種檢測基因表達的常用方法。
3、實時熒光定量PCR也就是Real-Time PCR,其最大的作用是檢測樣品中的初始DNA濃度。
至于三者的關(guān)系,RT-PCR和實時定量PCR應(yīng)該都屬于PCR,在RNA實驗中,這二者都會應(yīng)用到。
例如,你要比較2個組織中的某基因的表達差異,首先你要提取2個組織的總RNA,然后通過RT-PCR檢測該基因是否在2個組織中有表達,然后通過實時定量PCR測定該基因在2個組織中的表達量是否具有顯著性差異。