細胞轉染是將外來核酸RNA或DNA 等小分子物質轉移到健康細胞中以產生“轉基因細胞”的過程。 在轉染過程中，外源核酸鏈進入健康細胞后，核酸與細胞中現有的 DNA 結合，形成一個轉基因細胞。細胞轉染過程中如何提高轉染效率，轉染效率的影響因素有哪些。

細胞轉染的主要方法是什么？
細胞轉染主要分為兩大類，即：穩定轉染和瞬時轉染。

穩定轉染是將外源核酸繞過細胞膜，進入細胞，并通過核膜傳遞從而使外源核酸與宿主 DNA（或 RNA）整合以產生修飾基因。這種轉染方式所培育的細胞后代都將整合這種修飾基因，主要應用領域為：藥物篩選、研究形態變化、抗生素耐藥性等。
瞬時轉染是將外源核酸繞過細胞膜進入細胞，并且（如果是 DNA）通過核膜傳遞。與穩定轉染的區別是：外源 DNA 不會整合到宿主 DNA 中，而是通過蛋白質生產繼續表達自己。

瞬時轉染方式的主要特點是：外源 DNA 不會傳遞給未來的細胞后代，所以環境因素改改變或細胞分裂產生都將終止表達。瞬時轉染有助于了解基因沉默、抑制性 RNA 和小規模蛋白質生產。
至于，實驗中選擇哪種轉染方法，其實主要取決于兩個因素：你的研究方向和正在使用的細胞區別。
細胞轉染過程：
細胞轉染按細胞轉染過程的不同可以分為以下幾種：
生物轉染：通常被稱為轉導，方法是通過病毒感染方式將 DNA 整合到宿主細胞核中進行復制。也是醫學研究的常用方法。
化學轉染：化學轉染法是通過陽離子聚合物和脂質體將核酸鏈帶入細胞。通過使細胞帶負電和聚合物帶正電，這兩者被吸引，最終核酸沉積在細胞中的細胞轉染方法。
物理轉染：物理轉染法是基于電流、激光的轉染方法。比如：通過電轉儀實現轉染或者通過光轉染的方式，使激光束會在特定的亞細胞位置產生孔洞，來傳遞外源核酸。

決定細胞轉染效率的因素有哪些？
決定細胞轉染效率主要的幾個因素：
1. 細胞群的生長態勢與細胞活力：-在創建細胞分析的過程中，細胞活力往往具有決定性的作用。如果沒有健康的細胞群，那么轉染效率也相對低下，甚至還會得到不正確和誤導性的結果。
2.細胞融合度：細胞的融合度衡量細胞在給定表面上的堆積程度（不要與細胞密度混淆）。50% 的細胞匯合意味著一半的表面被覆蓋。融合過少或過多都會影響細胞對轉染的接受程度。
3.細胞類型：不同類型的細胞具有不同的壽命、細胞壁特征及功能。比如部分細胞容易進行轉染，而有些細胞則本身就難以轉染，所以轉染效率也會存在差異。
4.轉染的核酸類型：不同核酸的復雜程度也不相同。比如：DNA的結構 比 RNA 復雜，而 RNA 比某些單獨的核酸鏈更復雜。一般來說，核酸復雜的，轉染過程相對困難，轉染效率相應也較低。
5.轉染方法：使用不同的轉染方法，所獲得的細胞轉染效率也是不一樣的。



如何提高轉染效率？
在不同的轉染過程（生物、化學、物理）中，隨著技術和工藝不斷改進，轉染效率也在不斷提升。例如，光學技術和激光精度的每一次進步都會對光轉染產生有利的影響。
但在此之前，提高細胞轉染效率的方法主要有：
1. 培養健康的活力指數高的健康細胞群。細胞分選儀可以降低細胞分選時高電壓對細胞的刺激，是輔助培養健康細胞群的重要工具。
2. 優化核酸，保證有效的核酸純度。 細胞轉染過程中需要確保所引入細胞的 DNA 和 RNA 盡可能接近同質。否則，分析結果時變量太多，轉染效率會因不同類型的基因進入細胞而變得混亂。轉染前，可以制備不同濃度核酸來用于細胞檢測的測試。例如，通過逐步制備 25-250 ng 的核酸濃度以針對實驗的細胞群進行測試，從而篩選出合適的轉染濃度從而提升轉染效率。
3.實時校正每個孔的細胞群，使每個孔內的細胞群盡量保持適宜的密度。
當細胞大量聚集在一個孔中時，由于細胞接觸面會受到抑制，容易造成低轉染率。正常情況下，細胞的匯合度在大約 60-80%之間，轉染效率較高。

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