操作步驟：
1、準(zhǔn)備工作
A、 玻璃勻漿器、75℅乙醇預(yù)冷 ，離心機(jī)預(yù)冷至4℃ 打開超凈工作臺(tái)紫外燈15分鐘以上
B、 用酒精擦拭臺(tái)面 EP管標(biāo)記

2、勻漿處理
1、取一定量的純化過的孢子懸浮液，12000rpm ，離心5min，棄上清
a 、或者用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理，懸浮液不經(jīng)離心，直接加0.5ml Trizol reagent于冰上充分勻漿懸浮液樣品體積一般不要超過Trizol體積的10%.，然后再加入0.5ml Trizol 沖洗勻漿器，轉(zhuǎn)移至1.5ml EP管中
b、 直接在懸浮液中加入Trizol裂解細(xì)胞，加1ml Trizol.用取樣器吹打幾次.（離心取細(xì)胞，每5-10×106動(dòng)物、植物和酵母細(xì)胞或每107細(xì)菌細(xì)胞加1ml Trizol。加Trizol前不要洗滌細(xì)胞，以免降解mRNA。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞可能需要?jiǎng)驖{儀處理）

2、1ml Trizol Reagent，震蕩混勻

3、將勻漿樣品在15-30℃放置5mim，使得核酸蛋白復(fù)合物完全分離。

4、可選步驟:4 ℃ 12 000rpm離心10min，取上清。
如果樣品中含有較多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物結(jié)節(jié)部分等，可離心去除。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜、多糖、高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織樣品時(shí)，上層是大量油脂，應(yīng)除去。取澄清的勻漿溶液進(jìn)行下一步操作。

5、每使用1ml Trizol加0.2ml氯仿，蓋好管蓋，在漩渦振蕩器上震蕩15s，室溫放置3min。如不能渦旋混勻，可手動(dòng)顛倒混勻2min代替。

6、4 ℃ 12 000rpm，離心10-15min，樣品會(huì)分成三層：紅色的有機(jī)相，中間層和上層無色的水相，RNA主要在水相中，把水相（約600ul，約為所用Trizol試劑的60%）轉(zhuǎn)移到新管中。（如要分離蛋白質(zhì)和DNA，可保留黃色的有機(jī)相）

7、在得到的水相溶液中加入等體積（500ul）的異丙醇，上下顛倒混勻，-20℃ 放置20-30min。
（植物或動(dòng)物組織RNA提取中，容易沉淀出大量的蛋白等污染物，導(dǎo)致電泳檢測(cè)時(shí)看不到RNA。可以按以下步驟操作減輕污染：在上清中加入1/2體積的異丙醇，1/2體積的RNA助沉劑，然后進(jìn)行以下操作。）

8、4 ℃ 12 000rpm離心10min，去上清。
（離心前RNA沉淀經(jīng)常是看不見的，離心后在管側(cè)和管底形成膠狀沉淀。）

9、加入1ml 75%乙醇（DEPC水處理過的水配制）洗滌沉淀。加入后把管子敲一敲，盡量使RNA沉淀飄起來，每使用1ml Trizol至少加1ml乙醇。有時(shí)，為避免RNA被洗掉，此步可以省掉，洗滌之后可以晾干或者烤干乙醇，但是不能過于干燥，否則不易溶解。

10、4 ℃ 12 000rpm離心5min，棄上清；短暫快速離心，用移液器小心吸棄上清，注意不要吸棄沉淀。

11、室溫放置晾干（不要晾得過干，RNA完全干燥后會(huì)很難溶解，大約晾干2-3min左右即可）。加入適量DEPC水（根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，可加30-100ul水）或0.5%SDS，用槍頭吸打幾次，充分溶解RNA。50度保溫1小時(shí)。如RNA用于酶切反應(yīng)，勿使用SDS溶液。RNA也可用100℅ 的去離子甲酰胺。溶解，-70℃保存。可以分裝保存，防止污染，

12、取1ul+1ul buffer 電泳檢測(cè)RNA完整性，稀釋一定倍數(shù)，分光光度計(jì)測(cè)定純度和濃度。