HUVEC細胞的背景：
 
     人臍靜脈內皮細胞 (HUVEC) 是從臍帶靜脈內壁分離出來的原代細胞。內皮細胞常用于研究低氧、炎癥、氧化應激、感染反應及正常和腫瘤相關血管生成等應用。
 
 
   血管形成實驗:
 
       體外血管形成實驗能夠很好的模擬腫瘤血管發生過程，并且適合研究某些基因或藥物對這一過程的影響。血管內皮細胞（HUVEC）在基質膠（Matrigel）上保留了內皮細胞增殖分裂快、遷移速度快的特點，用成管的方法可以快速參與血管的基因和信號通路等。
 
   HUVEC細胞形態：
 
 

問題1
 成功的血管形成需要具備的條件有哪些？
                                                                                      中喬科研小助手解答
 
 
1.huvec細胞：原代的huvec傳代次數有限，建議在2-8代內進行實驗。
 
2.試劑的選擇：內皮細胞專用培養基、DMEM、FBS、基質膠、96孔板或24孔板。

3.基質膠的準備：

 A.提前24h將基質膠放入4度冰箱過夜、進行解凍備用。

 B.第二天將24孔板放在冰盒上，將基質膠用DMEM基礎培養基1:1進行稀釋一倍后離心，使基質膠跟培養基混勻，24孔板里加入基質膠100ul每孔，建議做重復孔；加基質膠一定垂直滴入孔底部，減少氣泡產生，使用震蕩的方法讓膠均勻分布。
 
C.放入孵箱30-60分鐘讓其形成凝膠，凝膠是半固體，在加入細胞前是否凝固直接關系到實驗的成敗。
 
4.實驗步驟：
 
A.huvec細胞細達到80%匯合度后準備消化，一般過夜培養后的細胞狀態更佳，收集細胞進行計數，并按照需求梯度稀釋調整細胞的濃度，請一定保證細胞狀態完好。
 
B.24孔板加入200ul的huvec細胞懸液，濃度約為12-20萬個細胞,建議做復孔；
細胞加入后不應該移動培養板，放入37度孵箱約4小時左右即可進行觀察血管是否形成。
 
C.一般在15小時后成管會開始緩慢皺縮凋亡。
 
D.結果分析、圖片采集。根據需求可用固定后進行熒光染色。
 
 
 
成功的血管形成圖：
 
                             
 
Huvec成管后分析
imagej軟件分析步驟
 
FIle-open-打開圖片-找到angiogenesis analyze插件即可。軟件會自動變成如下的圖形。請點擊箭頭所指的網格狀圖標;
 
點擊網狀圖標后點擊analyze HUVEC phase contrast選項后經過約幾分鐘時間即可生產如下圖一樣的圖片；
 
File-Save as 即可將圖片進行保存；
 
結果包括nodes節點。junctions交叉點。meshes網眼數還有網眼的面積。branches血管分支數; length總長度、 branching length分支長度、segments length主干的長度。
     
                                                         

 
 
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                                                               中喬新舟原代huvec簡介     
 
1.我司提供HUVEC于P1代凍存，每管含有細胞數量>5X105cells/ml；
2.經測試HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母菌、真菌，檢測均為陰性；
3.細胞來源正規，可溯源，可提供細胞流式及免疫熒光鑒定,可提供倫理報告；
                
                                                           熒光抗體vWF和CD31標記
 
4.HUVEC細胞專用培養基: 基礎培養基+5%胎牛血清+1%內皮細胞生長因子+1%青鏈霉素。
 
                                                               內皮細胞專用培養基
                                                                   貨號：ZQ-1304
                               
 
5.HUVEC細胞包被液： HUVEC復蘇前建議使用重組人纖連蛋白進行包被，輔助HUVEC的粘附和細胞質擴散。同時纖維粘連蛋白也適用于不能自身合成生物基質的細胞培養或在無血清培養基中培養的細胞。重組人纖連蛋白含有緩沖鹽。
 
                                                                重組人纖連蛋白
                                                                 貨號：CSP044
                                                      
6.HUVEC細胞的凍存：我司HUVEC細胞至少保證15次倍增，實驗過程中可進行凍存保種方便下次實驗使用。我司使用無血清凍存液，該凍存液含 DMSO、 葡萄糖等各種細胞營養成分，提高細胞存活率和活力，亦適合于無血清培養細胞和蛋白表達細胞。不含動物來源性蛋白， 不含血清，可減少各類細菌、病毒和支原體等污染，保證凍存細胞的安全。 通用于各種動物細胞株（腫瘤細胞和常規細胞）， 凍存細胞可在-80℃長期保存（>5 年）。
 
                                                                無血清細胞凍存液
                                                                  貨號：CSP042
 
           
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