首先了解小鼠腦部結構的大概位置，主要講述側腦室和海馬區域的位置。

側腦室的位置，如圖顯示的是比較容易注射的位置

Interaural 耳間 3.58 mm—3.22 mm

Bregma 前鹵 -0.22 mm-- -0.58 mm

最佳的位置為：X= 1.00 mm   Z= 1.5 mm

Lateral 橫向距離，0.60 mm-2.16 mm，最佳位置為0.80 mm

Y= 0.80 mm。

最終決定皮層區域的最佳位置

X=1.00 mm, Y= 0.80 mm, Z= 1.5 mm

海馬區域

Interaural 2.58 mm—1.50 mm

Bregma -1.22 mm-- -2.30 mm

前鹵 (Bregma)

海馬區域最佳位置，X=1.5 mm, Y= 2.0 mm, Z=2.0 mm。

實驗步驟

1. 利用某些顱骨外面的標志(如前囟、后囟、外耳道、眼眶、矢狀縫等)或其它參考點所規定的三維坐標系統，來確定皮層下某些神經核團結構的位置.

注意：操作為大鼠上門齒卡入橫桿，調節旋鈕壓緊鼻桿；將耳桿插入大鼠耳道，平衡調節左、右耳桿，使大鼠兩耳間連線與耳桿在同一直線上，保證左、右耳桿的刻度位置相同后調節旋鈕鎖緊耳桿。大鼠固定完好的判斷標準：鼻對正中，頭部不動，提尾不掉，目測大腦放置水平（使顱骨水平）。

2. 前囟點即Bregma點，位于冠狀縫和矢狀縫的交接處，以其作為顱骨三維坐標系統原點O。

3. Bregma點定位過程大體分為: 選定腦部靠中間的位置。剪除大鼠頂被毛后，用碘酒或酒精消毒，縱向切開頭皮，用止血鉗將皮膚左右分開，用刀片刮去顱蓋骨膜，或用雙氧水腐蝕頭蓋骨膜，徹底去除骨膜后讓Bregma點顯現出來。用腦定位儀讀取Bregma點數值作為三維坐標原點O。

4. 側腦室位置的定位，以眼間連線的中點為起點，垂直于眼間連線后移3-4 mm，然后側移1.1 mm左右，向下3 mm左右，即進入側腦室。

具體的位置依據小鼠的腦大小確定，坐標值，即ML值（X軸）、AP值（Y軸）、DV值（Z軸）。側腦室位置為前囟點旁開1.5 mm，向后囟方向1.1 mm，深2.0 mm（坐標即為±1.5，-1.1，-4.5）。調節X軸（1.5個單位）及Y軸（1.1個單位）旋鈕移動操作臂到坐標位置。

海馬區域的位置，X= 1.5 mm, Y = 2 mm, Z= 1.5 mm。

5. 10ul的微量注射器，注射劑量是2ul（兩側注射，各1 ul）,打藥時間2 min左右，打藥之后再停留2 min，然后慢慢的拔出注射器針頭。