皮膚為人體最大的器官，成纖維細胞是皮膚真皮層中主要細胞，而且是人體最容易獲得的體細胞。人皮膚成纖維細胞不但能夠促進表皮細胞的遷移、增殖和分化，還能分泌大量的膠原蛋白、彈性纖維蛋白及多種細胞修復因子，具有強大的自我更新能力，從而修復老化的皮膚。因此，已廣泛應用于抗皮膚衰老、整形外科、組織工程皮膚等領域。

人成纖維細胞取材于健康的人體，臨床標本經過徹底清洗避免污染，真皮層盡可能剪碎有利于成纖維細胞的遷出。形態上，成纖維細胞呈梭型或不規則三角形，中央有卵圓形核，胞質突起，生長時呈放射狀。體外培養的成纖維細胞多為梭形、多角形和扁平星形等，其形態尚可依細胞的功能變化及其附著處的物理性狀不同而發生改變。
 

人成纖維細胞形態

⭐ 下面介紹人成纖維細胞的原代培養方法

✔ 材料準備

◆ OriCell®人成纖維細胞（貨號HXXFB-00001）

◆ OriCell®人成纖維細胞完全培養基（貨號HXXFB-90011，套裝內含基礎培養基、優級胎牛血清和培養添加物）

✔ 實驗步驟

（1）水浴鍋37℃預熱。完全培養基溫浴到37℃。在15mL離心管中加入5mL以上完全培養基備用。

（2）從-80℃冰箱中取出細胞，放入37℃水浴鍋中，快速晃動，使凍存液迅速融化。注意融化過程必須晃動凍存管，保證凍存液融化迅速、均勻；且晃動時應避免水沒過管蓋造成污染；管內凍存液融化至只剩一個約2mm直徑的冰晶時，即停止水浴。繼續晃動凍存管，至冰晶融化。

（3）用75%醫用酒精擦拭凍存管外表面。

（4）在超凈臺中打開凍存管，用巴氏吸管或移液槍吸取細胞凍存懸液，轉移至先前準備的離心管中。

（5）用1mL完全培養基洗滌凍存管1次，收集殘留細胞，減少損失。

（6）細胞懸液以250×g，離心4min。

（7）離心后去除上清。加入2mL完全培養基，輕柔吹打細胞沉淀，充分吹散、混勻。

（8）將細胞接種到1個T25培養瓶或底面積相當的培養容器中。加入足量完全培養基，1個T25培養瓶中培養基總量不少于5 mL。

（9）搖勻細胞，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的CO2培養箱中。注意接種2h內不可移動、觀察細胞。這會嚴重影響細胞貼壁，造成狀態不佳、細胞聚團、貼壁不均勻等情況。

（10）復蘇次日，觀察細胞狀態，并更換新鮮的完全培養基或傳代。

（11）之后，每2天更換一次完全培養基，直到細胞生長至90%匯合，即需傳代。通常OriCell®人成纖維細胞傳代比例為1:3，72h內生長至可傳代匯合度。請根據細胞實際生長情況調整傳代比例。

⭐ 小TIP

✔ 培​養人成纖維細胞對于細胞密度有較高的要求，我們建議有條件且計數效率較高的情況下，進行手工計數，以期獲得精準的細胞濃度指導接種；在沒有精確計數條件的情況下，按照適宜比例傳代是更好的方法。

✔ 正常情況下OriCell®人成纖維細胞每代生長時間不超過72h，中途不需要換液。頻繁換液會破壞構建起的細胞微環境。

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