天信和固定床生物反應器貼壁細胞培養操作指南
下面為大家詳解天信和固定床生物反應器貼壁細胞培養操作步驟，以便您更好地理解貼壁細胞的操作過程。
操作步驟詳解
一、清洗固定床生物反應器
1. 擰掉頂蓋上的密封螺絲，取出罐體頂蓋和固定籃；
2. 用純化水沖洗玻璃罐內外壁和法蘭盤；
3. 用柔軟紗布擦洗罐體內部；
4. 反復沖洗固定篩片、套管、深層通氣管等；
5. 用柔軟紗布擦洗電極、槳葉等所有組件；
6. 用注射用水沖洗罐體內外壁和所有組件。
二、安裝固定床生物反應器
1. 倒入已經完全膨脹、濕潤的Cellcomb載體；
2. Cellcomb載體分布均勻后，下調固定籃上篩片，然后擰緊固定螺絲；
3. 倒入pH為7.4左右的PBS溶液清洗1次；
4. 再次倒入PBS溶液沒過載體、電極；
5. 安裝好頂蓋并擰緊螺絲；
6. 安裝工藝軟管并用止血鉗夾緊軟管；
7. 氣密性檢查：通入壓縮空氣，罐內壓力升到0.5bar左右，停止通氣并夾緊進氣軟管，放置6h檢查罐體內的氣壓，6h后壓力表沒有變化，則表示氣密性良好；
8. 高壓滅菌：打開尾氣、表層進氣管路上止血鉗，將罐體及所有組件進行高壓滅菌，滅菌程序為敞口液體程序121℃，45分鐘；
9. 滅菌結束后取出罐體，并放置至室溫；
10. 將反應器罐體與控制器連接，連接溫度、DO、pH、加熱毯、攪拌電機等；
11. 在無菌環境下將反應器與廢液桶、培養液桶、接種瓶等連接；
12. 接入壓縮空氣，將反應器罐內PBS通過管路排至廢液桶，用細胞培養液清洗載體2次；
13. 再次加入細胞培養液，沒過攪拌槳葉、pH電極等，調整反應器參數，進行細胞預培養。
三、細胞貼壁培養
1. 接入待培養的動物細胞；
2. 將溫度設置為37℃，溶氧為40%，pH值為7.0左右進行細胞培養；
3. 每24小時在線取樣一次，進行生化檢測和pH值測量；
溫馨提示：共取兩管樣品，第一管廢棄，只保留第二管樣品；液體單向流動，只出不進。
4. 取樣后將取樣管末端浸入75%的酒精。
溫馨提示：每24小時或每次操作都需填寫生物反應器操作記錄
四、下罐操作
1. 關掉控制面板上的所有的自動控制，只保留攪拌功能；
2. 用止血鉗夾住深層進氣和尾氣出氣，開啟表層進氣，并調節進氣流量；
3. 拆掉加熱毯，關掉攪拌功能，松開進氣管道；
4. 將罐內培養液排入廢液桶；
5. 排液完成后，夾緊進氣管道和排液管道；
6. 斷開電極與控制柜的連接，拆掉所有管路和附件；
7. 拆掉頂蓋螺絲，打開頂蓋，擰掉固定籃上的螺絲，取出上篩片；
8. 取樣：分別在上層、中層及下層各取0.5g Cellcomb載體樣品；
9. 在Cellcomb載體樣品中加入10ml結晶紫，將加入結晶紫的載體樣品放入搖床中（過夜后進行細胞計數）；
10. 用純化水反復沖洗反應器固定篩片，并用柔軟紗布擦洗，仔細沖洗、擦拭罐體內外壁、漿葉及其他組件；
11. 清洗完成后擰上頂蓋螺絲，罐體內裝滿0.1M的氫氧化鈉浸泡過夜。
五、細胞計數
過夜后對Cellcomb載體樣品進行細胞計數：
1. 從搖床中取出載體樣品并充分搖晃；
2. 在EP管內加入PBS溶液，將樣品移入EP管中進行稀釋；
3. 用移液槍反復吹打細胞懸液；
4. 將稀釋后的細胞懸液打在細胞計數板上；
5. 在顯微鏡下進行細胞計數。
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